在过去三十年里,胶质瘤的生存率几乎没有提高,预后极差。因此针对神经胶质瘤这种恶性肿瘤开发新的治疗手段非常迫切。尽管PD-1/PD-L1阻断治疗在多种恶性肿瘤中取得了前所未有的效应,目前针对胶质瘤PD-1/PD-L1治疗的临床治疗并未让复发胶质母细胞瘤患者生存有所改善。本研究中,我们发现TLX与PD-L1在高级别胶质瘤中高表达并呈正相关。此外,TLX高表达与胶质瘤免疫抑制微环境相关。在同种移植模型中,抑制TLX表达能抑制肿瘤生长并激活肿瘤免疫微环境,表现为PD-L1表达降低,T细胞与TAM表面PD-1也同时降低,杀伤性T细胞增加,M2型TAM含量降低等。体外实验证明TLX能直接激活PD-L1转录。本研究首次发现TLX通过正向调控PD-L1表达促进胶质瘤免疫逃逸从而促进肿瘤恶性进展。研究目的1.证明TLX的表达与胶质瘤免疫微环境异质性具有相关性。2.阐明TLX能通过调控PD-L1表达介导胶质瘤的免疫逃逸。3.阐明TLX调控PD-L1表达的分子机制。研究内容和方法1.TLX表达与胶质瘤免疫微环境异质性的相关性研究为进一步验证TLX与胶质瘤免疫微环境异质性的相关性,本研究将通过生信分析与临床样本相结合的方法。1)在线数据库分析TLX、PD-L1在胶质瘤中的表达与免疫微环境收集TCGA、CGGA数据库信息,分析TLX、PD-L1的表达水平和相关性。使用CIBERSORT、ssGSEA等算法分析胶质瘤的免疫微环境。2)临床样本中TLX等蛋白的表达情况和免疫浸润情况收集胶质瘤临床样本,通过免疫组化免疫荧光等方法检测TLX、PD-L1、PD-1的表达情况与免疫细胞的浸润情况。2.胶质瘤中TLX通过调控PD-L1的表达介导免疫逃逸的功能与机制研究通过生物信息学分析可知TLX与PD-L1表达呈正相关,所以推测TLX可通过调控PD-L1表达介导肿瘤免疫逃逸。1)构建胶质瘤动物模型,将TLX沉默或敲除细胞系及野生型细胞皮下或原位移植至免疫功能完善的小鼠体内,记录肿瘤生长并检测肿瘤免疫微环境与PD-L1在体表达情况。2)通过染色体免疫共沉淀与荧光素酶报告基因实验验证TLX对PD-L1基因的转录调控。实验结果1.TLX与胶质瘤免疫抑制微环境具有相关性;2.TLX与PD-L1在高级别胶质瘤中高表达并呈正相关,与不良预后呈正相关;3.皮下肿瘤模型与颅内肿瘤模型均证明,抑制TLX,肿瘤生长减慢,并能重塑胶质瘤免疫微环境。4.胶质瘤中TLX能激活PD-L1的转录调控其表达结论本研究首次提出,TLX能通过正向调控PD-L1的表达介导胶质瘤的免疫逃逸从而促进肿瘤的恶性进展,肿瘤细胞上的PD-L1能与TAMs与TILs上的PD-1结合介导免疫逃逸。因此,靶向TLX治疗有利于改善胶质瘤的免疫治疗效果。