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神经节苷脂是一类含唾液酸的鞘糖脂,其组分为鞘氨醇、脂酸和寡糖链。根据寡糖链上单糖数目和唾液酸的数目及唾液酸连接的位置可分为不同的类型。神经节苷脂GD1a是寡糖链上连有两个唾液酸的神经节苷脂,其分子式为(NeuNAcα2→3Ga1β1—3GalNAcβ1→4[NeuNAcα2→3]Ga1β1→4G1c1—1Cer)。GD1a 具有多种生物学活性,大量制备高纯度GD1a是继续深入研究的基础,然而GDla的天然含量很低,目前人工合成具有生物活性的神经节苷脂具有很大的困难,因此从猪脑中分离纯化得到高纯度的神经节苷脂GD1a具有重要意义。为了探讨获得高纯度GD1a的生产工艺,本文就以下内容进行探究:1.提取神经节苷脂方法的探究:采用Svennerholm和Fredman改良后的Folch分配法提取总神经节苷脂,为充分的提取GD1a,对Folch分配法的条件进行了优化。利用薄层层析(TLC)、高效液相层析(HPLC)及唾液酸含量测定进行分析,结果如下:常温下鲜组织除水后提取效果最佳,粗脂提取率达1.71%,唾液酸含量达3.90%,唾液酸产率达0.0667%。具体过程为冰丙酮处理1000 g猪脑组织,常温下氯仿-甲醇(v/v=1:2)溶液提取,Folch分配层析,冷冻干燥,最终获得神经节苷脂粗脂。2.纯化神经节苷脂方法的探究:由于Folch法提取得到的神经节苷脂粗脂中含有部分中性脂,根据神经节苷脂带有负电荷的特性,利用离子交换层析的方法去除总脂中的中性脂。为探究适宜工业化的生产途径,分别利用国产DEAE-Cellulose和DEAE-Sephadex A-25两种离子交换剂层析分离。由TLC结果分析可得国产DEAE-Cellulose无法吸附神经节苷脂,因此无法用于去除中性脂。DEAE-Sephadex A-25可以吸附神经节苷脂,通过平衡洗脱液除去中性脂。离子交换法获得的酸性脂中还含有磷脂、硫脂等酸性杂脂,采用碱处理法将其去除,并进一步利用硅胶柱层析进行纯化,获得总神经节苷脂。由TLC、HPLC分析可得总脂中含有GM1、GD1a和GT1b等神经节苷脂。唾液酸含量达19.7%,产率为1.20%。3.分离神经节苷脂GD1a方法的探究:不同的神经节苷脂所携带的唾液酸数目不同,唾液酸在寡糖链上连接的位置不同,因此所带负电荷不同,根据这一特点可对其进行分离。利用DEAE-Sephadex A-25层析柱,0.07 M、0.15 M和0.5 M醋酸铵/甲醇溶液梯度洗脱,所得0.15M级分为GD1a,纯度为35.0%,共获得340 mg,产率为17.0%。