福寿螺蛋白质的提纯及抗癌活性研究

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蛋白质是生物体中含量最高、功能最重要的生物大分子。做为生命的物质基础之一,蛋白质在催化生命体内各种反应、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用,实验研究表明福寿螺蛋白质含量丰富。 本实验以福寿螺为原材料,通过研究不同的盐浓度、pH值、浸提时间和操作温度对蛋白质提取的影响,再进行比较,从而获得最佳的提取工艺。同时通过硫酸铵分段沉淀、DEAE-32纤维素柱和SephadexG-75柱层析从福寿螺体内分离纯化到一种相对分子质量约为40kd的纤溶活性蛋白,紫外光谱法测定表明,该蛋白具有纤溶作用,经SDS-PAGE电泳显示为一条带。研究表明该蛋白作用最适Ph值为8.0,最适温度为59℃,热稳定性较好,金属离子Na+对酶的活力无影响,而K+,Mg2+,Ca2+可提高此蛋白酶的活力。采用平板法测定此蛋白酶的血纤维蛋白溶解活性,证明此酶具有强烈的纤溶活性。 采用MTT法测定福寿螺蛋白质对人舌癌细胞Tea-8113增殖的抑制效果,结果表明:福寿螺蛋白质在体外能显著抑制人舌癌细胞Tea-8113的增殖,药物浓度为0.0504g/mL,药物作用时间72h抑制率最高,达到93%,并呈现明显的药物剂量依赖关系。福寿螺蛋白具有较强的体外抗肿瘤活性。 实验采用鸡胚尿囊膜法在器官和体内水平观察福寿螺蛋白质对新生血管生成的抑制效应,同时采用红外光谱分析其主要官能团。结果表明:福寿螺蛋白质对鸡胚尿囊膜新生血管生成有良好的抑制作用,比阳性对照(地塞米松)对鸡胚生长发育影响较小;红外光谱特征吸收峰表现蛋白质和糖的红外光谱特征吸收峰,推断福寿螺蛋白有一种糖蛋白。福寿螺活性蛋白组分具有的抑制血管生成的作用,有可能用于肿瘤治疗。
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