前言 九十年代初，日本青森产业技术中心和弘前大学研究小组发现乌贼墨具有高效的抗肿瘤活性。随后，许多学者对其抗肿瘤作用机理及对免疫功能的影响等方面做了深入而具体的研究，这将有助于较全面地阐述乌贼墨及其提取物增强机体免疫功能的综合性效应，有利于对其进行充分的开发和综合利用。 乌贼墨是乌贼在遇到天敌时从墨囊中释放出来的一种自身保护性物质，含有大量的黑色色素颗粒。乌贼墨及其提取物抗肿瘤活性的作用机制已成为众多学者关注的问题。关于其抗肿瘤作用机制，国内研究较多，主要集中在免疫调节功能方面。 吕昌龙等研究结果表明，乌贼墨及其提取物没有表现出对肿瘤细胞直接的细胞毒作用，乌贼墨的抗肿瘤作用可能是使免疫系统功能增强，特别是细胞免疫功能增强的结果。乌贼墨具有增强巨噬细胞活性的作用，能提高小鼠血清IL-2、TNF、IFN-γ等细胞因子的产生水平，增强NK细胞、LAK细胞的肿瘤杀伤活性，诱导巨噬细胞合成NO，NO在杀伤肿瘤细胞的效应中起重要作用。 近年来的研究表明白细胞介素4(interleukin，IL-4)，是一种具有抗肿瘤作用的细胞因子。白细胞介素4与乌贼墨抗肿瘤作用机制之间是否存在介导免疫应答的联系，目前尚不清楚。本论文作为这一课题系列研究的一部分，在以往研究的基础上，检测了乌贼墨对小鼠淋巴细胞IL-4产生水平的影响，可进一步阐述乌贼墨抗肿瘤作用的机制。 实验材料与方法 36只BALB／C小鼠分6组，每组6只，其中5组为实验组，另一组为对照组。实验组小鼠每次灌胃5％乌贼墨0．SInl，每日一次，连续5天，对照组小鼠用同样方式给予等量生理盐水。分别在灌喂后第0天、第2天、第4天、第6天、第8天，处死小鼠，用ELISA法测定小鼠淋巴细胞兄一4的产生水平。 实验结果 乌贼墨对小鼠淋巴细胞IL－4产生水平的影响： 应用EllSA法检测经乌贼墨处理的小鼠淋巴细胞产生的IL－4水平变化，淋巴细胞产生IL－4的水平于末次乌贼墨灌胃后第0天、第2天、第十天、第6天、第8天，均无明显变化。实验组与对照组比较无显著性差异u＞0刀5人 讨 论 机体抗肿瘤的免疫效应是多途径的，既有特异性免疫反应问 CTL，抗体等X也有非特异性的免疫反应俄 NK细胞、LAK细胞、活化的巨噬细胞、中性粒细胞等人既有细胞免疫反应，又有体液免疫反应。在体内，宿主对肿瘤的免疫应答效应是细胞免疫和体液免疫对肿瘤作用的综合结果。 本课题以往的研究结果证明，乌贼墨能够刺激和增强巨噬细胞活性，同时也使NK细胞活性增强。乌贼墨的抗肿瘤作用也与其促进巨噬细胞的NO生成有关。乌贼墨在小鼠体内具有使TNF＊L＊＊L－2＊FN－Y等细胞因子产生水平增高的活性。乌 ·2· 贼墨及其提取物可通过诱生 Thl细胞因子（’INF－a、IL—2＊FN－ Y等）及活化小鼠的巨噬细胞和NK细胞，增强机体的免疫功能， 发挥抗肿瘤作用。 IL－4是一种主要由ThZ细胞亚群产生的细胞因子，可介导 体液免疫，具有抗肿瘤活性，为进一步阐述乌贼墨抗肿瘤作用的相 关机制，在以往研究的基础上，我们又进一步观察了经乌贼墨灌胃 后，小鼠淋巴细胞产生IL－4水平的变化。结果表明，淋巴细胞产 生脱一4的水平于灌胃后第0天、第2天、第4天、第6天、第8天， 均无明显变化。由此说明，在乌贼墨灌胃早期，主要刺激机体细胞 免疫功能。乌贼墨不提高IL－4的产生水平，提示应用乌贼墨不 易引起超敏反应的发生。 根据CD4”Th细胞所分泌的细胞因子不同，将其分为Tho、 Thl和’fhZ三种亚型。IL－2＊L－u、IFN－Y可抑制 Tho向 ThZ 分化，IL－4、IL－10可抑制Tho向Thl分化。以往的研究结果表 明，乌贼墨及其提取物可通过诱生Thl细胞因子（TNF－aJL－2。 IFN－Y等）及活化小鼠的巨噬细胞和NK细胞，增强机体的免疫 功能，发挥抗肿瘤作用。由于 IL－2、IL－12＊FN－Y可抑制 Tho 向ThZ分化，故我们检测的结果，经乌贼墨灌胃后，小鼠淋巴细胞 产生IL－4水平无明显变化，提示乌贼墨并非通过诱生小鼠淋巴 细胞产生IL—4发挥抗肿瘤作用。有关乌贼墨及其提取物对ThZ 细胞产生IL－10水平的影响，有待于进一步研究。 结 论 乌贼墨在应用早期，未检出乌贼墨对小鼠淋巴细胞的IL－4 分泌有诱生作用，提示乌贼墨可能不通过提高IL－4发挥抗肿瘤 作用，也提示乌贼墨的使用不易诱发过敏反应发生。