【摘 要】
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目的:
通过检测系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者CD4+T细胞microRNA(miRNA)表达水平,为揭示miRNA在SLE发生、发展中的作用奠定基础。
方法:
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目的:
通过检测系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者CD4+T细胞microRNA(miRNA)表达水平,为揭示miRNA在SLE发生、发展中的作用奠定基础。
方法:
1.密度梯度离心分离正常人、SLE患者的外周血单个核细胞,磁珠分离CD4+T细胞；
2.试剂盒提取miRNA和总蛋白；
3.miRNA微阵列芯片(microarry)高通量检测miRNA在正常人和患者的CD4+T细胞的表达水平；
4.茎环状引物实时定量聚合酶链反应(Stem-loop quantitativereal-time PCR,Stem-loop RT-PCR)检测miRNA的表达水平；
5.蛋白质印迹(Western blot)检测蛋白表达水平。
结果:
1.芯片结果显示:与正常对照组相比,SLE患者CD4+T细胞中miR-126,miR-1246,miR-1308,miR-574-5p,miR-638,miR-7显著上调(P＜0.01),miR-142-3p,miR-142-5p,miR-197,miR-186,miR-31显著下调(P＜0.01)。
2.Stem-loop RT-PCR验证:与正常对照组相比,SLE患者CD4+T细胞中miR-126明显上调(p＜0.001),miR-142-3p明显下调(p=0.001),miR-142-5p,miR-638无显著性差异(p=0.86,p=0.58)。
3.SLE患者CD4+T细胞中DNMT1的蛋白表达水平较正常人降低(P＜0.05),且与miR-126表达水平呈显著负相关(r=-0.628,P=0.012)。
结论:
SLE患者中CD4+T细胞中存在多个miRNA表达异常,其中miR-126可能通过调节DNMT1参与SLE疾病的发病过程。
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