circRNA在肝内胆管细胞癌中的差异性表达及circ_0089153对ICC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

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背景与目的:环状RNA(circRNA)异常表达与恶性肿瘤的发生发展关系密切。本研究初步探讨肝内胆管细胞癌(ICC)中circRNA的异常表达情况及circ_0089153对ICC肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:采用福建省立医院5例经病理确诊的ICC患者标本,通过高通量circRNA芯片技术筛选出ICC癌组织及对应癌旁组织中差异表达(FC>2倍、t检验P值<0.05)的circRNA,进一步在长度500-1500bp之间、FC>4倍且P<0.001、初始强度>300选取倍数变化最显著的circ_0089153行实时定量PCR验证。慢病毒过表达HCCC-9810、RBE细胞系中circ_0089153的表达水平,通过CCK8实验、划线实验、Transwell实验和流式凋亡实验检测circ_0089153对ICC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:与癌旁正常组织相比,ICC组织中存在差异表达的circRNA总计76条,其中ICC相对癌旁组织有63条表达增高、13条表达降低,进一步提高条件(a变化倍数>4倍且P<0.001;b每组的初始强度大于300以上;c每个circRNA的长度在500-1500bp之间)筛选出10条circRNA,其中8条上调(circ_0001402、circ_0002886、circ_0007750、circ_0006827、circ_0044226、circ_0001756、circ_0001359、circ_0062682),2条下调(circ_0048764、circ_0089153),尤以circ_0089153倍数变化(FC=103.2137)最明显,其在ICC组织中的相对表达量(7.8920±1.0673)明显低于癌旁正常组织(14.5815±0.7369)(P<0.0001)。实时定量PCR进一步验证,与基因芯片结果一致。CCK8实验结果显示circ_0089153过表达组ICC细胞的增殖活性(HCCC9810:114.8159±5.1381;RBE:117.2350±7.0792)与空载组(HCCC9810:100.0000±4.8970;RBE:100.0000±14.8965)相比显著性升高(P<0.05);流式细胞凋亡实验结果显示circ_0089153过表达组ICC细胞的凋亡率(HCCC9810:11.2767±0.2434;RBE:4.5267±0.3009)与空载组(HCCC9810:16.6733±0.6603;RBE:6.7933±0.5341)相比显著性降低(P<0.05)。细胞划线实验结果显示circ_0089153过表达组ICC细胞的迁移能力(HCCC9810:9.0702±1.0902;RBE:6.1970±0.6873)与空载组(HCCC9810:6.2065±1.1974;RBE:4.1978±1.1701)相比显著性增强(P<0.05);细胞侵袭实验结果显示circ_0089153过表达组ICC细胞的侵袭能力(HCCC9810:0.3696±0.0258;RBE:0.2967±0.0157)与空载组(HCCC9810:0.2743±0.0142;RBE:0.2498±0.0188)相比显著性增强(P<0.05)。结论:ICC组织中存在多种异常表达的circRNA,circ_0089153在ICC组织中低表达;过表达circ_0089153基因后,对ICC有促进生长、迁移、侵袭及抑制凋亡的作用。
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