研究背景 DADS是从大蒜中分离出的脂溶性单体有机硫化合物,可通过抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和细胞周期停滞等方式抑制多种肿瘤细胞的生长。我们前期的研究显示:DADS能诱导HL-60细胞生长阻滞在G₂/M期,但机制尚不完全清楚。cyclinB1是细胞周期G₂/M期的特异性周期素,是唯一随细胞周期变化而发生亚细胞分布改变的细胞周期素,cyclinB1的核转位是启动细胞有丝分裂的必要条件。p21是细胞周期蛋白依赖性激酶（cycle dependent kinase,CDK）抑制剂,可与CDK、cyclinB1和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）形成四元复合物,在细胞周期推进过程中发挥重要作用。研究表明:p21与cyclinB1诱导细胞G₂/M期生长阻滞可能涉及如下两种机制:形成p21-PCNA-cdc2/cyclinB1四元复合物竞争性抑制cdc25与PCAN结合,阻断cdc25催化cdc2去磷酸化;这种四元复合物阻断cdc2活化激酶（cdc2 activating kinase,CAK）磷酸化cdc2,以上两种机制协同抑制cdc2激酶的活化,诱导细胞G₂/M期生长阻滞。但是迄今为止,cyclinB1亚细胞分布和p21在DADS诱导肿瘤细胞G₂/M期生长阻滞中的作用尚未得到证实。 方法 用20μM DADS处理HL-60细胞,MTT法测定DADS对HL-60细胞增殖活性的影响,流式细胞术测定DADS对细胞增殖周期的影响,Western blot测定DADS对cyclinB1亚细胞分布、p21与c-myc的表达水平的影响,免疫共沉淀分析cyclinB1与p21两者相互作用,重组质粒pcDNA3-c-myc和对照空质粒pcDNA3分别转染HL-60细胞,用流式细胞术、Western blot以及丫啶橙染色法检测p21受到抑制后,DADS对细胞增殖周期和细胞命运的影响。 结果 为了探讨DADS对HL-60细胞增殖的影响,经20μM DADS、DMSO、及10nM全反式维甲酸（ATRA）孵育HL-60细胞24h,结果显示:DADS能抑制HL-60细胞增殖,20μM DADS对细胞增殖的抑制率与ATRA（10nM）对细胞的抑制率接近。为