目的：　　臭氧(ozone,O3)是一种广泛存在于空气中的光化学污染物。研究表明，O3对呼吸道有严重损伤作用，它能引起炎症反应，但其发病机制目前尚不明确，可能与细胞内钙稳态失衡有关。经典瞬时受体电位（transient receptor potential canonical，TRPC)是位于细胞膜上的一类重要的非选择性阳离子通道，主要通透钙离子和钠离子，是目前离子通道领域研究的热点之一。TRPC包括七个成员：TRPC1-7。研究提示，TRPC6在卵清白蛋白（ovalbumin，OVA）诱导的过敏性气道炎症反应中起重要作用。TRPC6能否在O3诱导的气道炎症反应中起作用未见相关报道。硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）是近年来发现的第三种气体信号分子，通过清除氧自由基、抑制细胞因子释放及降低细胞内钙离子浓度等发挥抗氧化、抑制炎症和扩张血管作用。H2S在O3暴露致小鼠气道炎症中的作用及可能作用机制迄今鲜少报道。本课题探究TRPC6在O3暴露致小鼠肺组织中的表达以及H2S供体硫氢化钠（sodium hydrosulfide，NaHS）干预后的作用及可能作用机制，将有助于阐明气道炎症反应的分子机制，为炎症性疾病的临床药物治疗提供新的思路。　　方法：　　第一部分：随机将C57BL/6小鼠分成Control组和O3组。将小鼠放入小鼠隔离器中饲养，适应环境一周。O3组小鼠于适应环境后的第1天，第3天，第5天在1.0part per million(ppm)O3环境中暴露3小时；Control组于相同环境下新鲜空气暴露。检测指标：（1）行为学观察各组的表现。（2）测定小鼠气道反应性。（3）收集支气管肺泡灌洗液（bronchial alveolar lavage fluid，BALF）做白细胞总数（the total number of white blood cells，total WBC）和分类计数以及检测BALF中总蛋白浓度。（4）苏木素-伊红染色（hemotoxylin and eosin，HE）观察肺组织病理变化。（5）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法检测小鼠肺组织匀浆液中白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）的含量。（6）硫代巴比妥酸（thiobarbituricacid，TBA）法检测小鼠肺组织匀浆液中丙二醛（malondialdehyde，MDA）的产生情况。　　第二部分：建模方法同第一部分。检测指标：（1）RT-PCR法检测各组小鼠肺组织中TRPC6和核转录因子κBp65（nuclear factor-kappa B p65，NF-κBp65）mRNA表达。（2）Western blot和免疫组织化学法观察肺组织中TRPC6和NF-κB p65蛋白的表达与定位情况。　　第三部分：随机将C57BL/6小鼠分为Control组、O3组、O3+NaHS组和NaHS组。将小鼠放入小鼠隔离器中饲养，适应环境一周。O3组和O3+NaHS组小鼠于模型建立第1天，第3天，第5天在1.0ppmO3环境中暴露3小时，Control组和NaHS组于相同环境下新鲜空气暴露，O3暴露前30分钟O3+NaHS组和NaHS组腹腔注射0.14umol/kg NaHS。检测指标：（1）亚甲基蓝法测定Control组和O3组内源性H2S合成酶活性。（2）行为学观察各组的表现。（3）测定小鼠气道反应性。（4）收集BALF做白细胞总数和分类计数以及检测BALF中总蛋白浓度。（5）HE染色观察肺组织病理变化。（6）ELISA法检测小鼠肺组织匀浆液中IL-6和IL-8的含量。（7）TBA法检测小鼠肺组织匀浆液中MDA的产生情况。（8）Western blot观察肺组织TRPC6和NF-κBp65蛋白的表达情况。　　结果：　　第一部分：（1）O3组暴露后，小鼠气道反应性、BALF中白细胞总数、巨噬细胞数（macrophages，Macro）、淋巴细胞数（lymphocyte，Lympho）、中性粒细胞数（neutrophils，Neutro）和总蛋白浓度明显高于Control组（P＜0.05），嗜酸性粒细胞（eosinophils，Eosino）无明显变化（P＞0.05)，表明气道炎症模型成功建立。（2）O3组肺组织匀浆液中IL-6和IL-8含量显著高于Control组（P＜0.01）。（3）O3组肺组织匀浆液中MDA含量明显高于Control组（P＜0.05）。　　第二部分：（1）O3组TRPC6和NF-κB p65mRNA表达显著高于Control组（P＜0.01）。（2）O3组TRPC6和NF-κB p65蛋白表达明显高于Control组（P＜0.05），蛋白主要位于小鼠肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞和浸润的炎症细胞。（3）相关性分析显示，小鼠肺组织中TRPC6和NF-κBp65蛋白表达均与Penh/NS%max、白细胞总数、巨噬细胞数、淋巴细胞数、中性粒细胞数呈显著性正相关，与PC100显著呈负相关（P＜0.01）。且TRPC6蛋白与NF-κB p65蛋白也呈显著性正相关（P＜0.01）。　　第三部分：（1）O3组肺组织匀浆液中内源性H2S合成酶活性明显低于Control组（P＜0.05）。（2）O3暴露前腹腔注射NaHS后，小鼠气道反应性、BALF中白细胞总数、巨噬细胞数、淋巴细胞数、中性粒细胞数和总蛋白浓度与O3组相比明显降低（P＜0.05），嗜酸性粒细胞数无明显变化（P＞0.05)，表明H2S减轻了O3暴露后所致的气道炎症。（3）O3+NaHS组肺组织匀浆液中IL-6和IL-8含量显著低于O3组（P＜0.01）。（4）O3+NaHS组肺组织匀浆液中MDA含量明显低于O3组（P＜0.05）。（5）O3+NaHS组TRPC6、NF-κB p65蛋白表达明显低于O3组，差异有统计学意义（P＜0.05）。　　结论：　　（1）O3暴露后，小鼠出现了明显的气道炎症。　　（2）O3暴露后，TRPC6、NF-κB p65mRNA和蛋白表达明显升高，与气道炎症呈显著性相关。　　（3）外源性H2S干预后，显著减轻了O3暴露后的炎症反应，其机制可能与抑制TRPC6/NF-κB信号通路有关。