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目的:探讨多种细胞周期调控蛋白在食管正常上皮、上皮内瘤变组织、食管鳞状细胞癌中的表达及意义,研究细胞周期调控的变化,讨论细胞周期调控失衡的可能原因,为食管的癌变机制研究提供理论依据;分析它们在食管鳞状细胞癌中的表达与临床各病理参数的相关性,为食管癌的临床诊断提供理论支持;应用免疫荧光双标与激光扫描共聚焦显微镜相结合的方法分析实验结果,并与免疫组织化学方法相比较,探讨新方法的优势与研究意义。方法:制作组织芯片,120例食管癌手术标本均取材食管正常上皮组织、上皮内瘤变组织及食管鳞状细胞癌组织。用免疫组织化学Envision二步法对各级组织中多种细胞周期调控因子的表达进行检测,并对其结果进行统计分析。采用免疫荧光双标与激光扫描共聚焦显微镜相结合的方法对其中的各级组织进行检测、观察并采集图片,对比免疫组织化学与免疫荧光双标技术。采用SPSS13.0软件包对结果进行统计学分析。结果:(1)cyclinD1、CDK4、cyclinE、CDK2蛋白在正常食管上皮表达较低(28.3%、28.3%、16.7%、28.3%),在瘤变上皮中逐渐增加,在食管鳞状细胞癌中表达较高(67.5%、84.2%、46.7%、63.3%),分化程度越低表达越高,组间比较差异有统计学意义。淋巴结转移组CDK4表达率高于无淋巴结转移组(P=0.015,且<0.05)。(2)p14、p15、p18、p19、p21、p27蛋白在正常食管上皮表达高(阳性率分别为29.2%、30.0%、34.2%、29.2%、49.2%、45.8%),在食管上皮内瘤变中表达较低,在食管鳞状细胞癌中随分化程度的降低而逐渐有所增高。(3)p16、p57在正常食管上皮中表达高于瘤变组织和癌组织,在食管鳞癌组织中表达最低(11.7%、27.5%)。(4)在食管鳞状细胞癌中,p18与cyclinD1、CDK4蛋白表达呈正相关(r分别为0.621、0.696),p19与cyclinD1、CDK4蛋白表达呈正相关(r分别为0.615、0.630)。cyclinD1与CDK4蛋白表达呈正相关(r=0.670),p18与p19二者呈显著正相关(r=0.833)。(5)对比免疫荧光双标方法与免疫组织化学方法,显示cyclinD1与p18在正常食管上皮、上皮内瘤变组织、食管鳞状细胞癌组织中均有阳性表达,且两者在部分区域存在共表达。结论:(1)cyclinD1、CDK4、cyclinE、CDK2蛋白在正常食管上皮的表达低,在瘤变上皮中有所增高,在食管鳞状细胞癌中表达高,且随分化程度的降低而逐渐增高,组间差异明显,表明cyclinD1、CDK4及cyclinE、CDK2可能在食管鳞状细胞癌的发生、发展中发挥重要作用。淋巴结转移组CDK4表达率高于无淋巴结转移组,表明CDK4的高表达促使食管鳞状细胞癌更具有侵袭性。(2)p14、p15、p18、p19、p21、p27蛋白在正常食管上皮表达较高,在食管上皮内瘤变中表达较低,在食管鳞状细胞癌中随分化程度的降低而逐渐有所增高,表明这些基因可能在细胞周期的反馈环路中,为了抑制鳞状细胞癌发生发展过程中高表达的cyclin和CDK,而反馈性地表达增加。也可能在癌变过程中发生了基因突变或缺失,从而过表达了无功能的蛋白质。(3)p16、p57蛋白在食管癌变过程中逐渐降低,在食管癌中表达最低,可能发挥了抑癌基因的作用或者存在其它调控机制。(4)在食管鳞状细胞癌中p18、p19分别与cyclinD1、CDK4蛋白表达呈正相关,p18与p19二者呈正相关,表明cyclinD1、CDK4高表达可能诱导p18、p19的表达。亦或p18、p19的高表达是为了对cyclinD1、CDK4高表达发挥抑制或拮抗作用,它们之间可能存在反馈机制。(5)免疫荧光双标法结果与免疫组织化学方法结果相符,免疫荧光双标法与激光扫描共聚焦显微镜相结合可直接显现双标记物的定位及共表达情况,在医学研究中具有重要意义。