【摘 要】
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目的:1.通过生物信息学方法分析Tβ10在肝癌数据集中表达水平及其与肝癌分期、肝癌患者生存预后的相关性。2.通过体外细胞实验研究Tβ10在人肝癌细胞系中的表达水平,及对Tβ10表达进行干扰后于肝癌细胞迁移、侵袭及凋亡行为的影响,并探讨其可能作用机制,以期发现肝细胞癌诊断、预后评估的分子生物标志物,及治疗潜在靶点。方法:1.生物信息学分析:在Oncomine数据库中分析Tβ10在肝细胞癌数据集中的转
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目的:1.通过生物信息学方法分析Tβ10在肝癌数据集中表达水平及其与肝癌分期、肝癌患者生存预后的相关性。2.通过体外细胞实验研究Tβ10在人肝癌细胞系中的表达水平,及对Tβ10表达进行干扰后于肝癌细胞迁移、侵袭及凋亡行为的影响,并探讨其可能作用机制,以期发现肝细胞癌诊断、预后评估的分子生物标志物,及治疗潜在靶点。方法:1.生物信息学分析:在Oncomine数据库中分析Tβ10在肝细胞癌数据集中的转录水平。随后在GEPIA数据库中进一步检验并分析其临床价值。2.细胞实验:采用实时荧光定量PCR检测2株肝癌细胞系（HepG2、MHCC-97L）和人正常肝细胞系QSG-7701中Tβ10 mRNA表达水平。并进一步转染HepG2及MHCC-97L细胞株获得siTβ10实验组及siNC阴性对照组。实时荧光定量PCR检测两种细胞转染后Tβ10 mRNA的表达水平。细胞划痕愈合实验测定干扰Tβ10表达后对肝癌细胞迁移行为能力的作用。通过Transwell实验检测下调Tβ10后HepG2细胞侵袭能力的变化。DAPI及PI联合染色观察干扰Tβ10表达对HepG2细胞核形态的影响。Western blot检测转染siTβ10后两种肝癌细胞中E-cadherin以及N-cadherin的表达变化,同时检测转染siTβ10后HepG2肝癌细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果:1.生物信息学分析:Oncomine数据库中多数肝癌数据集中Tβ10在肝癌组织中表达升高;GEPIA数据库中Tβ10在肝癌中表达较正常肝组织升高,其高表达影响肝癌患者的临床预后,但与临床分期无明显关系。2.细胞实验:与人正常肝细胞相比,Tβ10 mRNA在2株肝癌细胞中表达水平明显增加（P<0.05）。肝癌细胞经Tβ10 siRNA转染后,Tβ10的转录表达水平降低（P<0.01及P<0.05）,且肝癌细胞的迁移侵袭行为受到抑制（P<0.05）。DAPI及PI联合染色结果显示HepG2-siTβ10组细胞出现细胞核浓缩凝集,为亮蓝色荧光,出现分叶和破碎,且红色荧光也多于HepG2-siNC组;Western blot结果显示抑制Tβ10可下调两种肝癌细胞中N-cadherin的表达水平（P<0.01）,上调两种细胞中E-cadh erin的表达（P<0.05）;同时干扰Tβ10可降低肝癌细胞中Bcl-2/Bax的比值（P<0.05）。结论:Tβ10 mRNA在肝细胞癌细胞和组织中表达水平较正常肝细胞及正常肝组织中升高,且Tβ10高表达的肝细胞癌病例临床预后较差。Tβ10可能通过诱导上皮间质转化来促进肝癌细胞的侵袭和迁移行为。同时,Tβ10可能通过调节Bcl-2/Bax信号通路来抑制肝癌细胞凋亡。因此,Tβ10有望成为肝癌的诊断预后评价标记物并提供潜在治疗靶点。
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