论文部分内容阅读
降血压肽是一类具有降血压作用的蛋白质低分子肽。从食物蛋白质中提取的降血压肽相对于化学降血压药物,具有安全性高、消化吸收性强、降血压效果温和且对正常血压无影响、无副作用等优点,己经成为生物活性肽研究领域最热门的方向之一。本文以罗非鱼的鱼皮和鱼鳞为原料,用单因素和正交试验的方法研究制备对血管紧张素转换酶(ACE)有抑制活性的降血压肽的生产工艺。首先,分别对鱼皮脱脂、漂白与鱼鳞脱灰的工艺进行优化;接着以水解度(DH)及ACE抑制率为指标,选择复合蛋白酶酶解,分别对其水解工艺条件进行优化;然后采用超滤技术对所制备的降血压肽分别进行分离纯化,比较不同组分的ACE抑制率,测定高ACE抑制率组分的氨基酸组成,并运用MALDI-TOF-MS法分析其相对分子质量分布,最后按优化工艺生产的鱼皮降血压胶原肽进行动物实验。实验结果如下:鱼皮制备降血压肽的最佳工艺:首先用NaOH脱脂,其浓度为1.0%、料液比1:12、脱脂30min;接着漂白,先用NaClO(15mL/100g原料)氧化漂白4h,再用H2C202(用量1.0%)还原漂白50min;然后在55℃、pH7.0、料液比1:5、酶与底物质量比2.0%条件下,酶解5h。该工艺的DH为34.48%,所制备的降血压肽对ACE的抑制率达76.16%,得率为83.43%。其酶解液经超滤分离获得相对分子质量小于2000Da的组分对ACE抑制率最高,达到81.11%;该组分的氨基酸主要含有Gly和Pro,分别为22.21%和11.51%;其相对分子质量范围为 600-800Da。鱼鳞制备降血压肽的最佳工艺:首先用HCl脱灰,其用量3.5%、料液比1:12、脱灰l.0h,然后在55℃、pH8.0、料液比1:6、酶用量2.5%条件下酶解5h。该工艺的DH为37.48%,所制备的降血压肽对ACE的抑制率达76.66%,得率为35.46%。其酶解液经超滤分离获得相对分子质量小于2000Da的组分对ACE抑制率最高,达到80.15%;该组分的氨基酸主要含有Gly和Pro,分别为22.04%和11.40%;其相对分子质量范围为1300-2000Da。经检测所制备的鱼皮、鱼鳞降血压肽的质量卫生指标符合QB2732-2005水解胶原蛋白的标准。急性毒性实验结果显示木实验制备的降血压肽属于无毒物质。动物实验结果显示鱼皮降血压肽对原发性高血压大鼠(SHR)有明显的降压效果,可达30mmHg,对正常血压的京都大鼠(WKY)无明显影响。