【摘 要】
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目的探讨应用RNAi技术沉默信号转导子与转录活化子3(STAT3)基因对人乳腺癌细胞的影响。方法①应用免疫组化SABC法检测STAT3在人乳腺癌组织中的表达;②以STAT3已知序列为靶点,
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目的探讨应用RNAi技术沉默信号转导子与转录活化子3(STAT3)基因对人乳腺癌细胞的影响。方法①应用免疫组化SABC法检测STAT3在人乳腺癌组织中的表达;②以STAT3已知序列为靶点,构建psilencer1.0-U6-stat3-siRNA重组质粒;③通过体外、体内实验,研究重组质粒转染MCF-7细胞及裸鼠瘤内注射重组质粒后STAT3的表达状况及对细胞凋亡的影响。结果①免疫组化结果显示,STAT3在人乳腺癌组织中的阳性表达率及染色强度明显高于正常组织;②成功构建psilencer1.0-U6 -stat3-siRNA重组质粒,并且应用限制性内切酶Hind III进行消化,证实重组质粒不能被消化;③重组质粒转染MCF-7细胞后,Western blot和RT-PCR结果证实,STAT3表达受到很大抑制;流式细胞仪检测,凋亡细胞丫啶橙/溴化乙锭染色实验及MTT实验结果提示细胞出现凋亡,生长明显受到抑制;④体内研究结果显示psilencer1.0-U6-stat3-siRNA组荷瘤裸鼠肿瘤生长明显受到抑制,瘤组织免疫组化结果显示,瘤块中心出现大面积的细胞坏死以及核固缩等细胞凋亡征象,中心区STAT3表达呈阴性,周边区呈阳性的特殊表现,同时根据图象分析仪测得的灰度值显示,本组瘤组织促凋亡基因Bax阳性表达明显增强,并且Western blot及RT-PCR进一步提示, STAT3的表达明显减弱。结论应用RNAi技术沉默STAT3基因可以降低人乳腺癌细胞中STAT3的表达,导致细胞凋亡进而抑制肿瘤的生长。
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