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目的:1、探讨红霉素通过抑制氧化应激对烟草烟雾暴露下人巨噬细胞炎症反应的影响。2、探讨红霉素对烟草烟雾暴露下人巨噬细胞PPARγ表达的影响。方法:选取人单核细胞系U937细胞,用终浓度为200ng/ml的佛波酯孵育24h后将其诱导为人巨噬细胞,以人巨噬细胞为研究对象。用细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK8)检测烟草烟雾提取物(0.1、1、2、3%CSE)、红霉素(0.1、1、10、100ug/ml EM)对细胞增殖活性的影响。细胞分组及处理:对照组、CSE组(细胞在含1%CSE培养基中孵育24h)、CSE+EM组(细胞在含有1ug/ml EM的培养基中预孵育24h,再在含1%CSE的培养基中孵育24h),PPARγ抑制剂GW9662组(细胞在含10umol/ml GW9662的培养基中孵育24h);用荧光显微镜及荧光酶标仪观察和检测活性氧ROS的释放水平;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症因子IL-6和IL-8的释放水平;用Western blot法检测各组细胞蛋白中PPARγ和NF-κB p65蛋白表达水平;用RT-PCR法检测各组细胞PPARγ和NF-κB p65 mRNA的相对表达量;用免疫共沉淀法(Co-IP)检测PPARγ和NF-κB p65相互作用。结果:1.药物干预细胞,CSE终浓度≤1%及EM终浓度≤10 ug/ml时对人巨噬细胞增殖活性无明显影响;与空白组相比较,CSE终浓度在2%、3%及红霉素为100ug/ml时人巨噬细胞增殖活性受到抑制(P均<0.05)。2.与对照组比较,1%CSE能够促进人巨噬细胞ROS、IL-6、IL-8释放(p均<0.05);与CSE组比较,CSE+EM组中1ug/ml红霉素预孵育24h后能够抑制1%CSE对人巨噬细胞中ROS、IL-6、IL-8的上调作用(p均<0.05);与空白对照组比较,GW9662组ROS、IL-6和IL-8释放增多(p均<0.05)。3.与对照组比较,1%CSE能明显抑制人巨噬细胞PPARγ蛋白及mRNA的表达和促进NF-κB p65蛋白及mRNA的表达(p均<0.05);与CSE组比较,CSE+EM组中1ug/ml EM预孵育细胞24h后,能够促进人巨噬细胞PPARγ蛋白及mRNA表达和抑制NF-κB p65蛋白和mRNA的表达(p均<0.05),没有观察到红霉素对1%CSE刺激下的PPARγ表达具有明显的时间依赖性;GW9662组人巨噬细胞PPARγ蛋白及mRNA受到抑制,同时NF-κB p65蛋白及mRNA表达上调(p均<0.05)。4、经免疫共沉淀检测,PPARγ和NF-κB p65存在相互作用,即与对照组比较,1%CSE能够抑制人巨噬细胞PPARγ蛋白表达的同时促进NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05);与CSE组比较,CSE+EM组1ug/ml红霉素预孵育能够上调人巨噬细胞PPARγ蛋白表达的同时抑制NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05);与对照组比较,GW9662组细胞PPARγ蛋白表达受到抑制的同时NF-κB p65蛋白表达上调(P<0.05)。结论:1.烟草烟雾暴露下的氧化应激可能抑制了人巨噬细胞PPARγ的表达导致NF-κB p65表达增多而促进IL-6、IL-8的释放进而促进炎症反应。2.红霉素可能是通过抑制烟草烟雾暴露下人巨噬细胞ROS释放而上调PPARγ的表达,抑制NF-κB p65的表达进而抑制IL-6、IL-8的释放而发挥抗炎作用。