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前言短串联重复序列(short tandem repeats, STR)是指重复单位长度为2-6bp的重复序列,其长度多态性来源于重复单位拷贝数的个体差异。STR基因座以其易于扩增、分型准确、适用于微量降解检材、遗传信息含量高,并能够进行复合扩增和联合检测等多种优点,成为了目前法医物证学最常用的遗传标记。面对数量日益增多和复杂性不断提高的各种法医学案件,为得到及时、准确、权威的鉴定结果,应用包含多个STR基因座的检测试剂盒,进行复合扩增、联合检测的DNA自动化分型成为了目前法医物证学的主流技术。自从1997年11月,美国联邦调查局(FIB)确立了以CSF1PO, FGA, TPOX, THO1, vWA, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51、D21S11等13个基因座作为核心基因座以来,各种包含一系列理想STR基因座的商业化试剂盒以其准确、快速、方便和灵敏的特点广泛应用于个人识别和亲子鉴定等法医学的重要领域。对试剂盒中所包含的STR基因座进行不同人群的遗传多态性调查也随之成为当今法医物证学的研究热点。Sinofiler试剂盒是美国ABI公司根据中国人群的遗传特点,研制开发的最新试剂盒,D6S1043和D12S391两个基因座是该试剂盒推出的,区别于其它试剂盒的新的遗传标记。本研究调查并获得这两个基因座在辽宁地区汉族人群中的遗传多态性数据,为Sinofiler试剂盒的法医学应用提供理论依据,并为群体遗传学的研究提供基础性数据。材料与方法基因组DNA提取并检测。根据美国国立生物技术信息中心数据库公布的引物序列合成D6S1043和D12S391两个基因座的扩增引物,单基因座PCR扩增后,应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)的方法分别检测研究样本在两个基因座上的遗传多态性,收集并混合包含不同等位基因的扩增产物,并结合测序结果制得等位基因分型标准物(Ladder)。以Ladder为参照,通过PAGE分离DNA片段结合银染显谱的方法,判定200例辽宁地区汉族无关个体在两个基因座上的基因型,计算相关法医学数据。调节退火温度和引物用量比例这两个复合扩增的关键因素,建立两个基因座的复合扩增方法,并利用该方法对3组三联体家系样品进行亲缘关系的分析。结果1、本课题所研究的200例无关个体,在D6S1043基因座共发现由14种等位基因构成的49种基因型,等位基因分布于9～22。在D12S391基因座上共发现由12种等位基因构成的43种基因型,等位基因分布于15～26。2、本研究中,D6S1043和D12S391基因座的各项法医学参数如下：杂合度(H)分别为0.84和0.87,个人识别力(DP)分别为0.9651和0.9477,非父排除率(PE)为0.7363和0.6875,多态性信息含量(PIC)分别为0.826和0.8499。3、建立了D6S1043和D12S391基因座复合扩增的方法,两个关键因素退火温度和引物比在本研究中的最佳条件分别为60℃,0.8：1。结论1、D6S1043和D12S391基因座在中国辽宁地区汉族人群中的遗传多态性分布良好,具有较高的法医学应用价值。2、D6S1043和D12S391基因座的遗传多态性存在民族和地域性差异,在人类遗传学研究中具有一定的应用价值。3、利用PAGE结合银染检测的方法可以对D6S1043和D12S391基因座的复合扩增产物正确分型。