1、目的与意义慢性浅表性胃炎(Chronic Superficial Gastritis, CSG)由各种不同病因引起的胃黏膜病变,以胃黏膜层中浆细胞及淋巴细胞等慢性炎症细胞浸润为主要表现,不伴有胃黏膜的萎缩性改变。据流行病学调查,慢性浅表性胃炎发病率居各种胃肠病之首,占慢性胃炎(Chronic gastritis, CG)病发率的51.7%-85.45%,是临床上最多见的慢性胃炎及胃肠疾病,同时,其发病率随年龄的增长而增加且复发率高,目前尚无特效的治疗方法。国内外大多数学者认同本疾病发展模式为“慢性浅表性胃炎-慢性萎缩性胃炎一胃黏膜萎缩一肠上皮化生一异型增生一胃癌”。1978年WHO就将慢性萎缩性胃炎列为胃癌的癌前状态,在此基础上伴发有不完全肠腺化生(IM)和(或)中、重度不典型增生(ATP)则被视为癌前病变,故慢性浅表性胃炎的有效治疗对消化道癌症的预防、诊治也均有重要意义。安胃疡胶囊是以甘草提取物-甘草总黄酮为主要成分的中药制剂(中药新药5类,国药准字Z10970059),临床上主治胃及十二指肠球部溃疡,并可用于溃疡愈合后的维持治疗,有补中益气,解毒生肌之功效。在多年的临床实践中,安胃疡胶囊也被用于治疗慢性浅表性胃炎,并取得较好的疗效,但实验室药效学评价尚不明确。本课题采用低浓度氨水自由饮用配合饥饱失常刺激制备大鼠慢性浅表性胃炎模型,并在此基础上开展安胃疡胶囊治疗慢性浅表性胃炎药效学评价并探讨其相关作用机制的试验研究。2、实验方法2.1大鼠慢性浅表性胃炎模型的制备及安胃疡胶囊药效学评价采用0.02%氨水自由饮用,同时配合饥饱失常(1天禁食,2天饱食)复制大鼠慢性浅表性胃炎模型,以胃组织病理学检查结果作为模型复制成功的判定标准。慢性浅表性胃炎模型大鼠进行随机分组后连续灌胃30天,以动物一般体征、胃黏膜损伤状况、胃组织病理学检查(HE染色、扫描电镜)、胃黏膜上皮细胞粘蛋白分泌功能、胃微循环血流量、胃肠激素分泌功能等作为药效学评价指标。2.2安胃疡胶囊治疗慢性浅表性胃炎的机制研究实验周期结束,elisa测定血清中IL-1β、IL-8及PGE2含量,同时,流式细胞仪测定EDTA抗凝全血中CD3+、CD4+、CD8+含量及百分率。2.3安胃疡胶囊抗炎作用2.3.1醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验各组小鼠灌胃相应药物,其中模型对照组给予水。小鼠给药30min后,尾静脉注射0.5%伊文思蓝溶液(0.1ml/10g),随即腹腔注射0.6%的冰醋酸溶液(0.1ml/10g),20min后颈椎脱臼处死和腹腔注射5ml生理盐水并轻揉小鼠腹部,使腹腔内染料充分溶于生理盐水中并混合均匀。然后剪开小鼠腹部肌肉,吸出腹腔洗涤液4ml并用生理盐水定容至10ml,3000rpm/min离心15min,取上清液在紫外分光光度计595nm处测定其吸光度(OD)值。2.3.2角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀实验实验前在大鼠左踝关节上用标记笔做测定标记线并测定其致炎前容积(两次测定取平均值)。测定结束,由左后脚掌腱膜下向踝关节周围注射1%角叉菜胶(0.1ml/只),随即灌胃给予药液。在致炎给药后30min、60min、90min时,测定足趾容积值,按下列公式计算肿胀率。肿胀率(%)=(致炎后容积-致炎前容积)/致炎前容积×100%2.4安胃疡胶囊镇痛作用评价2.4.1醋酸所致小鼠扭体实验各组动物灌胃相应药物,其中模型对照组给予水。小鼠给药后30min时,腹腔注射0.6%醋酸溶液(0.1ml/10g),随即计数其20min内扭体次数及首次扭体潜伏期时长。小鼠每次扭体以腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部高起等为判别标准。2.4.2热辐射所致大鼠甩尾实验实验前将大鼠置固定筒内,黑色标记笔标记大鼠距尾尖1/3处作为测试点。使大鼠尾巴自然下垂于筒外并固定于测定槽中且安静时,用激光甩尾痛觉测试仪聚光灯产生恒定强度的光束照射在尾端标记处(准备强度为5%、测试强度为80%),测定鼠尾急速摆动的时间(此时间作为大鼠痛阈值),另外,实验前筛选动物基础痛阈在3-15秒间。实验中,测定大鼠灌服给药(模型对照组灌胃水)之后30min、60min、90min时痛阈值(每个时间点测定两次,测定间隔5min)。3、实验结果3.1安胃疡胶囊对大鼠慢性浅表性胃炎的治疗作用3.1.1对体重恢复及一般生理状况的改善作用CSG大鼠灌胃安胃疡15天后,高剂量组体重净增长与模型对照组比较差异显著；给药30天后,安胃疡胶囊高、中和低剂量组体重平均净增长幅度均大于CSG模型对照组。3.1.2对胃黏膜炎症的抑制作用大鼠胃部解剖大体观察可见,正常对照组大鼠胃黏膜光滑柔软,呈橘红色；CSG模型对照组大鼠黏膜充血水肿,有散在点状、斑或条状出血和糜烂,可见陈旧性出血点和新鲜出血点。经Image-Pro Plus软件分析,安胃疡胶囊给药30天后,中、低剂量组大鼠胃黏膜损伤面积减少、黏膜损伤率显著降低；扫描电镜结果显示,CSG模型对照组大鼠胃小凹不规则、上皮细胞表面溃烂,出现大小不一、形状不规则的糜烂面并见红细胞、炎性细胞渗出。安胃疡胶囊给药治疗后,胃腺排列基本规则,上皮细胞结构基本完整清晰、表面溃烂面积减小,损伤程度减轻。3.1.3对胃组织病理性损伤的抑制及修复胃组织病理学检查(HE染色)结果表明,安胃疡胶囊给药30天后,大鼠胃黏膜固有层炎性细胞数减少,胃腺排列较整齐平整,腺管构造较规则,黏膜固有层及黏膜肌层厚度恢复并接近正常对照组动物水平,安胃疡胶囊中、低剂量组与模型对照组比较差异显著；大鼠胃组织病理等级分析统计结果表明,安胃疡胶囊高、中、低三个剂量组对胃组织病理性损伤均有显著的抑制及修复作用,与模型对照组比较具有统计学差异；胃黏膜AB-PAS染色结果表明,安胃疡胶囊高、低剂量组上皮细胞分泌粘蛋白指数显著升高,中剂量组酸性粘蛋白指数显著升高,与模型对照组比较差异显著。3.1.4显著改善CSG大鼠胃肠激素分泌功能与正常对照组比较,模型对照组胃液pH值、胃液分泌量及胃蛋白酶活性均有显著性差异。安胃疡胶囊连续灌胃30天后,CSG大鼠胃分泌功能有一定程度的改善,安胃疡胶囊三个剂量组胃液H+浓度降低；安胃疡胶囊高、低剂量组胃液分泌量减少,胃蛋白酶活性显著降低。同时血清胃动素水平升高,胃泌素水平下降。3.1.5改善CSG大鼠胃微循环血流量实验结果表明,CSG模型组大鼠胃微循环血流量显著下降,与正常对照组比较差异显著。安胃疡胶囊给药30天后幽门部、幽门部血流量值增加,与模型对照组比较安胃疡胶囊三个剂量组胃微循环均有较大程度的改善,中剂量组作用显著。3.2安胃疡胶囊治疗慢性浅表性胃炎的机制研究安胃疡胶囊对慢性浅表性胃炎大鼠血清中IL-1β、IL-8水平有显著降低作用,并显著上调PGE2水平。同时,安胃疡胶囊高剂量组外周血CD4+/CD8+比例显著升高。3.3安胃疡胶囊抗炎作用小鼠腹腔毛细管通透性实验结果表明,与模型对照组比较,安胃疡胶囊高、中和低剂量组腹腔洗涤液OD值降低,中、低剂量组具有显著性差异；大鼠角叉菜胶致炎后,在30min、60min时间点,安胃疡胶囊高、中剂量组显著抑制大鼠足趾肿胀程度,中剂量组抗炎作用时间延伸至90min。3.4安胃胶囊镇痛作用在扭体实验中,安胃疡胶囊可延长小鼠首次扭体的潜伏期,同时降低20min内扭体次数,与模型对照组比较,安胃疡胶囊高、中和低剂量组小鼠的潜伏期均显著延长,扭体次数均显著降低；大鼠甩尾实验结果表明,与模型对照组比较,安胃疡胶囊高剂量组在给药后30min有显著性镇痛作用,中、低剂量组在给药后60min有显著性镇痛作用。4、研究结论4.1安胃疡胶囊对慢性浅表性胃炎(CSG)的药效学作用主要表现在以下方面：4.1.1抑制CSG胃黏膜炎症,减少炎症对胃黏膜的损伤。4.1.2恢复胃黏膜屏障,对损伤的胃黏膜具有保护和修复作用。4.1.3改善胃肠激素的分泌,减少攻击因子分泌。4.2安胃疡治疗慢性浅表性胃炎相关药理机制安胃疡胶囊对慢性浅表胃炎的药效学作用与抑制体内的促炎细胞因子IL-1β、IL-8水平,提高PGE2水平,上调T淋巴细胞CD4+/CD8+比例,改善机体免疫功能等机制相关。4.3抗炎、镇痛作用抗炎实验结果表明,安胃疡胶囊对小鼠腹腔炎症及大鼠足趾炎症具有显著的抑制作用。小鼠镇痛实验证明,安胃疡胶囊具有显著的镇痛作用,镇痛作用起效时间与药物剂量相关。