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β-半乳糖苷酶是果实成熟过程中唯一作用于β-(1,4)-半乳糖苷键而使细胞壁产生半乳糖残余物的酶,与果实软化密切有关。本研究以台湾甜桃、美国黑李、龙眼梅、油(木奈)、漳红番木瓜等果树的叶片(或果肉)为材料,改良了基因组DNA和总RNA的提取方法,采用同源克隆技术,分离出编码β-半乳糖苷酶的基因片断或cDNA片断,为采用反义RNA技术减缓果实软化进程奠定基础,主要研究结果如下: 1.改良了桃、李、梅、(木奈)、番木瓜基因组DNA和总RNA的提取方法。对传统CTAB法提取基因组DNA以及TRiZoL提取总RNA的方法进行改良,得到纯净、完整的基因组DNA和总RNA样品。 2.根据苹果β-半乳糖苷酶cDNA序列,设计一对特异引物,直接进行PCR扩增,克隆了台湾甜桃、美国黑李、龙眼梅、油(木奈)等核果类果树β-半乳糖苷酶基因片断,测序结果表明,这些片断的大小分别为1388bp、1388bp、1389bp、1389bp,它们之间具有很高的同源性,达98.90%。用同一对特异引物,通过RT-PCR,也克隆了桃的幼果β-半乳糖苷酶cDNA片断,测序结果表明,该片断的长度为862bp,编码286个氨基酸,序列分析结果表明,这个片断与蔷薇科果树中的苹果、日本梨、欧洲梨的β-半乳糖苷酶基因具有较高的同源性,平均为87%。 3.根据苹果和梨β-半乳糖苷酶cDNA序列,设计另一对特异引物,通过RT-PCR扩增,克隆了漳红番木瓜叶片和果实编码β-半乳糖苷酶cDNA片断,测序结果表明,这两个片断长度均为791bp,编码263个氨基酸,它们之间具有同源性很高,达99.12%,仅出现7个碱基的差异,与欧洲梨、苹果、日本梨、丰香草莓、杧果、甜橙等果树的β-半乳糖苷酶cDNA的同源性也很高,平均为80%-88%。