目的:建立新疆骆驼蓬药材中游离氨基酸的含量测定方法及分离提取工艺,测定不同药用部位、不同采集时间的骆驼蓬各游离氨基酸的含量,研究骆驼蓬不同部位氨基酸在不同采摘季节的经时量变规律与总生物碱月积累动态变化之间的相关性,为研究骆驼蓬生物碱的生物合成机理、揭示其在植物中形成转化的实质奠定基础,并对今后生物碱的结构改造、仿生合成提供依据。在此基础上通过对比鸭嘴花碱的急性毒性及骆驼蓬草中氨基酸类成分对鸭嘴花碱急性毒性的影响,考察骆驼蓬草中氨基酸类成分对鸭嘴花碱主要药动学性质的影响,为骆驼蓬药材氨基酸及生物碱成分的合理利用奠定一定基础。方法:①收集不同药用部位、不同采集时间的骆驼蓬,建立骆驼蓬游离氨基酸分离测定的方法,并进行方法学考察。②以游离氨基酸的含量之和为指标,采用单因素实验、正交实验分别筛选回流提取法和超声提取法提取骆驼蓬药材游离氨基酸的工艺参数,并对两种方法的优选工艺进行比较,确定提取工艺。③测定不同采集时间、不同药用部位的骆驼蓬游离氨基酸含量,研究骆驼蓬地上部分游离氨基酸的经时量变规律与总生物碱月积累动态变化之间的相关性。④采用Bliss法分别测定鸭嘴花碱及骆驼蓬草中氨基酸类成分干预的鸭嘴花碱的LD50,考察骆驼蓬草中氨基酸类成分对鸭嘴花碱急性毒性的影响。⑤大鼠灌胃鸭嘴花碱(45mg/kg)测定不同时间血浆样本中鸭嘴花碱的浓度,并与混合氨基酸干预给药1周后大鼠血药浓度比较,采用PK Solution 2.0数据处理软件以统计矩法计算药动学参数,初步考察骆驼蓬草中氨基酸类成分对鸭嘴花碱体内过程的影响。结果:①采用高效液相色谱法建立了骆驼蓬不同部位12种游离氨基酸的含量测定方法。色谱条件为:日本岛津VP-ODS色谱柱(4.6×250mm,5μm);以0.10mol/L乙酸铵溶液(pH6.5)-乙腈为流动相梯度洗脱,流速1.0m L/min,检测波长254nm,柱温40℃。12种氨基酸分别在其线性范围内且线性关系良好,精密度、重复性、稳定性、衍生化重复性均良好,RSD均小于2.0%,平均回收率在98%~102%。②氨基酸提取工艺研究结果表明,回流提取法更适合骆驼蓬药材游离氨基酸的提取。优选的回流提取工艺条件为:提取温度为70℃,50倍量,乙醇浓度为60%条件下提取1.5h。③测定不同采集时间及骆驼蓬不同部位(地上部分、根、种子)的游离氨基酸的含量,绘制出含量变化趋势图,并进行相关性分析,结果表明:骆驼蓬地上部分中主要含有脯氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、丝氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸等氨基酸;根中主要含有赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等氨基酸;种子中主要含有赖氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、脯氨酸等氨基酸。骆驼蓬不同部位游离氨基酸的总含量高低顺序依次为:种子、根、地上部分。骆驼蓬药材不同部位游离氨基酸总含量以7月份为最高,然后逐渐下降。不同采集时间的骆驼蓬地上部分的氨基酸中,脯氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、亮氨酸的含量均从5月份逐渐升高,在6月份达到最高,7月后逐渐降低,9~11月小幅波动;甲硫氨酸含量从5月份逐渐升高,在9月份达到最高,在10月略微降低,在11月小幅升高;丝氨酸、色氨酸随着月份的变化含量逐渐降低,在5~6月下降较快,7月份略有回升,11月降到最低;甘氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、丙氨酸随着月份的变化含量逐渐降低。氨基酸含量累积规律和相关性分析结果表明:苯丙氨酸可能在骆驼蓬植物中参与苯丙烷类化合物代谢途径,并通过多次酶促反应生成脱乙酰骆驼蓬苷、骆驼蓬苷等黄酮类化合物;丝氨酸、色氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、丙氨酸和赖氨酸可能参与了植物生成骆驼蓬碱的次生代谢过程;丝氨酸、色氨酸、甘氨酸、缬氨酸、精氨酸和脯氨酸可能参与了植物生成去氢骆驼蓬碱的次生代谢过程。精氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸等也可能通过骆驼蓬中的微生物代谢而生成鸭嘴花碱。④鸭嘴花碱的LD50为308.25mg/kg,95%可信区间为268.13~354.36mg/kg;骆驼蓬草中氨基酸类成分干预后鸭嘴花碱的LD50为376.94mg/kg,95%可信区间为330.04~430.52mg/kg,经LSD检验和对数结果的t检验,表明两者之间有显著性差异,骆驼蓬草氨基酸类成分对鸭嘴花碱确实具有一定的减毒的作用。⑤大鼠体内药动学研究结果表明,鸭嘴花碱和氨基酸类成分干预后的鸭嘴花碱的Cmax分别为2897.86和2216.85ng/m L,t1/2Ke分别为146.98和114.60min、MRT分别为271.27和177.38 min,AUC(0-t)分别为701.90和508.74μg?min/mL。经方差分析和t检验,这些药动学参数之间均有显著性差异,表明骆氨基酸类成分对鸭嘴花碱的体内药代动力学过程确有影响。结论:建立的HPLC测定游离氨基酸含量的方法准确可靠。优选出的回流提取工艺合理、可行、稳定,可用于实验室提取骆驼蓬游离氨基酸。骆驼蓬中游离氨基酸的经时量变规律与生物碱、黄酮类成分月积累动态变化呈一定的相关关系。骆驼蓬草中氨基酸类成分对鸭嘴花碱确有一定的减毒作用,并对鸭嘴花碱的体内过程有一定影响。