百合（Lilium spp.）是五大切花花卉之一，属于乙烯跃变型花卉。花卉衰老受乙烯的调控，通过RNAi技术下调或者敲除乙烯生物合成过程中的关键基因（ACC氧化酶基因，ACO），可以延缓花卉衰老，延长切花寿命。ACO基因在花卉衰老过程中呈花组织特异调控模式，选择一个强的花特异表达启动子驱动ACO RNAi载体，可以降低或消除因组成型启动子驱动ACO RNAi载体在植物的各个组织和所有发育阶段表达可能造成的负面影响。课题组前期构建了四个花特异嵌合启动子，转化了模式植物夏堇。本研究分析了四个嵌合启动子在转基因夏堇中的活性，目的是为了筛选出一个增强的、且花特异表达的启动子，用于切花百合抗衰老遗传改良的研究。此外，针对百合再生率及遗传转化率低、嵌合体多的问题，初步建立了百合体细胞胚再生体系，通过农杆菌介导法及基因枪法转化了ACO RNAi载体。本研究取得的主要结果如下：1.在课题组前期研究的基础上，分析了四个嵌合启动子p35S-PCHS-Ω，p35S-LCHS-Ω，pOCS-PCHS-Ω和pOCS-LCHS-Ω的功能。运用GUS组织化学染色、GUS荧光定量和实时定量PCR方法，分析了GUS基因在转基因夏堇中不同的表达水平及组织特异性。结果表明：嵌合启动子p35S-PCHS-Ω和p35S-LCHS-Ω驱动强的、组成型GUS表达，尤其在蓝紫色的花冠（p35S-PCHS-Ω），蓝紫色的花冠和根（p35S-LCHS-Ω）。嵌合启动子pOCS-PCHS-Ω仅在蓝紫色的花冠驱动较强的GUS表达，但表达量低于p35S-PCHS-Ω。嵌合启动子pOCS-LCHS-Ω驱动GUS表达在蓝紫色的花冠和根。其中，pOCS-PCHS-Ω展现出增强的、花特异表达的模式，可以用于取代35S启动子驱动ACO RNAi载体，进行百合抗衰老遗传改良的研究。2.构建了由35S启动子和增强花特异启动子pOCS-PCHS-Ω驱动的ACO RNAi植物表达载体。从东方百合‘索邦’（Orential hybrid lily ‘Sorbonne’）花瓣的cDNA中克隆得到ACO正反义片段ACO-S和ACO-A，将正反义片段分别插入干扰载体pKANNIBAL的相应位置，构建了由35S启动子驱动的含有内含子发夹结构的ACO RNAi载体pK-ACO-S-A；经两步酶切连接最终得到由35S启动子驱动的ACO RNAi植物表达载体：pCAMBIA1301-35S-RNAi-ACO，并导入根癌农杆菌EHA105。为了降低或消除因组成型启动子35S驱动ACO RNAi载体在植物的所有组织和各个发育阶段表达可能所造成的负面影响，用增强的花特异启动子pOCS-PCHS-Ω替换35S启动子，构建了由增强的花特异启动子pOCS-PCHS-Ω驱动的ACO RNAi植物表达载体：pCAMBIA1301-OPCHS-RNAi-ACO。3.初步建立了百合体细胞胚再生体系。选用东方百合‘索邦’（Orential hybrid lily‘Sorbonne’）、‘伯尼尼’（Oriental hybrid lily ‘Bernini’）和OT百合‘罗宾那’（Oriental×Trumpet hybrid lily ‘Robina’）3个百合品种不同花器官（花丝、花梗、花柱、子房和花药）诱导胚性愈伤组织，结果表明花丝的胚性愈伤诱导率最高（‘索邦’22.79%，‘伯尼尼’16.51%，‘罗宾那’17.77%）；取五个不同时期的花丝，幼嫩时期花丝（stageⅠ）胚性愈伤诱导率最高，是stageⅤ的3-4倍；stageⅤ的花丝取上、中、基三部分，仅基部花丝底部切口处诱导出胚性愈伤。对于胚性愈伤的增殖，使用MS培养基添加不同浓度的PIC和蔗糖，筛选最佳增殖培养基，结果显示添加2mg L^-1PIC和60g L^-1蔗糖胚性愈伤的增殖率高，体胚早期萌发现象少。体胚再生植株时，MS培养基添加1g L^-1AC及30g L^-1的蔗糖，再生率最高。组织学及扫描电镜观察显示，百合体胚发生经历了四个典型的胚胎发育时期：球形胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶期胚。4.将ACO RNAi载体（pCAMBIA1301-35S-RNAi-ACO）导入东方百合‘索邦’（Oriental hybrid lily ‘Sorbonne’）的基因组中。采用农杆菌介导法和基因枪法转化‘索邦’胚性愈伤，转化时，胚性愈伤的潮霉素抗性浓度确定为25mg L^-1。得到的潮霉素抗性植株经PCR检测、Southern杂交和GUS组织化学染色，表明ACO RNAi载体已导入百合的基因组中，获得了3个百合转基因株系，为进一步研究提供了材料基础。