小鼠iPS细胞系的建立及向生殖细胞的诱导分化

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iPS细胞(induced pluripotent stem cell,iPSC)具有分化成机体所有类型组织细胞的潜能,且克服了ES细胞不可避免的伦理问题和临床移植中的免疫排斥问题。其建系和定向分化研究已成为当今研究的热点领域。生殖细胞在个体发育中占有重要地位,iPS细胞体外分化获得的生殖细胞,不仅可作为基因修饰的源头细胞,通过受精即可获得转基因动物,且对不孕不育的治疗提供了很好的解决方案。本研究采用pMXs-逆转录病毒载体介导Yamanaka OSKM四因子转录,结合Dox控制的Tet-on诱导系统,成功建立了小鼠iPS系,并对其生物学特性进行分析鉴定,在AP活性,染色体数目,干细胞标记,体内畸胎瘤组织切片和体外分化免疫荧光的鉴定试验中,证实该iPS细胞系具有和ES细胞相似的特性。将获得的小鼠iPS细胞以3×104个/mL浓度悬滴培养制作EB,分化形成的细胞,可观察到持续的跳动现象,经免疫荧光鉴定,其表达心肌特异性蛋白GATA4。添加一定浓度RA的诱导液,可促使小鼠iPS细胞诱导分化为生殖细胞的前体细胞,其表达减数分裂前生殖细胞的特异性蛋白DAZL。为进一步体外获得功能性生殖细胞奠定技术基础。
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