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多西他赛自临床应用以来,治疗肿瘤的效果显著,上市制剂的临床应用越来越广泛,但其胃肠道和血液系统毒性、过敏反应等毒副作用,影响临床治疗,给患者带来痛苦。因此通过新型的药物递送系统的研究,进一步提高药物的治疗指数,降低毒副作用,是目前相关研究的热点之一。在药物递送系统的研究中,通过纳米材料、生物技术和物理化学等理论设计肿瘤靶向脂质体,从而进一步提高药物疗效,降低毒副作用,是研究的重要方向。普通脂质体由于易被网状内皮细胞吞噬并清除而难以进入肿瘤组织,聚乙二醇修饰的脂质体延长其在血液中的滞留时间,容易透过肿瘤组织的毛细血管,更有效地在肿瘤部位渗漏和聚集。利用靶向肿瘤本身及肿瘤新生血管内皮细胞上的某些受体的多肽对脂质体表面进行修饰,能够进一步增强制剂的靶向性,降低毒副作用。本课题在普通pH敏感脂质体的基础上,制备被动和主动肿瘤靶向相结合的NGR修饰的多西他赛pH敏感长循环脂质体：通过聚乙二醇(PEG)修饰达到长循环功能,减少网状内皮系统的吞噬和清除,提高制剂体内稳定性；采用肿瘤靶向多肽NGR进行修饰,使脂质体能够主动靶向至肿瘤部位,提高药物在肿瘤组织的聚集量：利用琥珀酸胆固醇单酯(CHEMS)的pH敏感机制靶向释放药物,共同实现靶向递送和控制释放的功能。本文通过处方筛选制备了多西他赛pH敏感长循环脂质体(DTX/PLL)和NGR修饰的多西他赛pH敏感长循环脂质体(DTX/NGR-PLL),研究脂质体的理化性质和体外释放特性,并考察了脂质体的药物动力学性质和体内外肿瘤靶向性。主要研究方法与结果如下：1. DTX/PLL的制备与评价采用HPLC测定多西他赛的含量,建立测定脂质体包封率的方法。在多西他赛pH敏感脂质体处方研究的基础上,以脂质体包封率为指标,通过单因素筛选确定脂质体中长循环材料CHEMS-PEG2000的用量。结果表明长循环材料的用量为磷脂酰乙醇胺(PE)的5%时包封率最高,包封率为71.88+0.99%,为最优处方。按照最优处方制备脂质体,并对其进行考察,结果表明所制脂质体外观形态良好,粒径为192.54±7.73 μm,Zeta电势为-27.9±0.9 mV。为研究脂质体释放的pH敏感特性,在不同pH释放介质中进行体外释放实验,测定不同制剂的体外释药特征。结果表明与多帕菲@相比DTX/PLL在pH7.4介质中较稳定,72 h时累计释放率达到81.88%,证明其具有缓释功能：而在pH5.0介质中DTX/PLL释放加快,48 h时累计释放率为85.50%,证明了其pH敏感的体外释放特性。2. DTX/NGR-PLL的制备与评价为进一步提高脂质体的肿瘤靶向性,通过在脂质体表面饰靶向多肽实现肿瘤的主动靶向。设计合成具有氨肽酶(CD13)受体靶向的多肽NGR的CHEMS-PEG2000-GNGRG聚合物,以脂质体包封率、细胞荧光摄取强度为指标,在DTX/PLL的基础上进行处方筛选,确定DTX/NGR-PLL的最优处方中靶向材料用量为PE的0.8%；最优处方所制脂质体脂质体外观形态良好,粒径为202.34±7.40 nm,Zeta电势为-25.7±2.9 mV；体外释放实验表明,NGR修饰后的脂质体DTX/NGR-PLL中药物释放行为与未修饰的脂质体DTX/PLL相似,DTX/NGR-PLL在pH7.4介质中72 h时累计释放率为81.58%,而在pH5.0介质中脂质体48 h时累计释放率为89.39%,证明其缓释及pH敏感特性；初步稳定性评价实验中,室温(25℃C)条件下保存3周、低温4℃冰箱中6周,脂质体溶液的外观性状、粒径和EE的变化不大,稳定性较好。3.药物动力学研究为评价脂质体的体内长循环功能,本部分以多帕菲@和普通pH敏感脂质体(DTX/PSL)作为对照制剂,考察DTX/PLL和DTX/NGR-PLL在大鼠体内的药代动力学特性。DTX/PLL和DTX/NGR-PLL在各个时间点的血药浓度较多帕菲@和DTX/PSL溶液组明显提高,AUC0-∞值都显著增大,DTX/PLL和DTX/NGR-PLL(AUC0-∞=41.521和AUC0-∞=46.430),较Duopafei(?)(AUC0-∞=12.290)和DTX-PSL(AUC0-∞=28.749)组明显提高,与普通脂质体(DTX/PSL)相比,PEG修饰的两种长循环脂质体(DTX/NGR-PLL>DTX/PLL)在大鼠体内的滞留时间(MRT)更加延长,MRT0-∞:DTX/NGR-PLL> DTX/PLL>DTX/PSL,实验结果表明DTX/PLL和DTX/NGR-PLL均可明显延长药物的MRT,具有显著的体内长循环的作用。4.体内、外的靶向性研究通过MCF-7[CD13(-)]和HT-1080细胞[CD13(+)]考察脂质体的体外肿瘤靶向性。MTT法测定的细胞毒性结果表明DTX/PLL和DTX/NGR-PLL的抗肿瘤活性较游离药物明显增强,IC50值均降低,且DTX/NGR-PLL对HT-1080的细胞毒性较DTX/PLL明显增强；细胞摄取实验中两种细胞对脂质体的摄取较游离溶液明显增强,两种细胞对两种制剂摄取的不同,验证了脂质体中NGR多肽的靶向作用。荧光探针标记的脂质体在荷瘤裸鼠肿瘤组织的荧光切片实验表明,两种脂质体均能成功靶向至肿瘤组织,靶向肽修饰后的靶向效果更明显,证明DTX/NGR-PLL在体内具有较强的肿瘤靶向能力。给药组小鼠组织、切片表明,DTX/NGR-PLL脂质体具有良好的安全性,对主要器官无明显毒性。本文合成了NGR修饰的靶向材料,通过筛选制备了DTX/PLL和DTX/NGR-PLL,所制脂质体外观良好,粒径均匀,体外释放实验证明了脂质体的pH敏感特性,大鼠体内药物动力学实验验证了体内长循环作用,体内外靶向性实验证明了肿瘤的靶向性。