【摘 要】
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目的本研究旨在利用基因工程方法克隆丝瓜籽蛋白luffin-a的基因,构建其表达载体,并获得有活性蛋白,为基因工程生产和改造luffin-a奠定基础.[结论]本实验采用RT-PCR的方法,从
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目的本研究旨在利用基因工程方法克隆丝瓜籽蛋白luffin-a的基因,构建其表达载体,并获得有活性蛋白,为基因工程生产和改造luffin-a奠定基础.[结论]本实验采用RT-PCR的方法,从未成熟丝瓜籽中克隆得到了正确的luffin-a基因,并将其插入到载体质粒pET-44a(+)中,成功构建了luffin-a的表达质粒pET-44a(+)-luffin-a.重组质粒转化的大肠杆菌BL2l(DE3)在IPTG诱导下,表达出分子量约为27kD的蛋白质,与目的蛋白分子量一致.而蛋白质电泳表明目的蛋白主要以包含体形式表达,所得包含体经反复洗涤后纯度可达70﹪以上.洗涤后的包含体经尿素溶解,透析复性,可得到少量的复性蛋白,纯度在30﹪左右.复性液经Blue-Sepharose 6B亲和纯化法,得到90﹪以上的纯度.MTT法测定luffin-a和RTA蛋白对不同细胞的毒性作用,结果表明两者具有相当的细胞毒性.Luffin-a基因的成功克隆和表达为基因工程生产和改造luffin-a奠定了基础,并可进一步与临床病毒实验室合作共同研究其抗HIV活性.
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