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人参出自《神农本草经》,具有安神益智、大补元气、补脾益肺生津、复脉固脱、祛邪扶正等功效,主入人体的肺经、脾经和心经。我国人工栽培人参已经有1600多年的历史,人参产量约占世界人参总产量的70%。目前,人参的种植主要以人工栽培为主,然而人参在栽培过程中易受多种病害的侵害,其中土传病害对人参危害最大,不但能对人参根茎造成损害,而且严重影响了人参的产量和品质。因此,快速、准确的进行土壤中病原菌检测,对于及时的开展病害预防和治理至关重要。本文对引起人参锈腐病、立枯病和根腐病的致病菌Ilyonectria spp.、Rhizoctonia solani、Fusarium oxysporum进行分子检测,根据NCBI数据库中全基因组序列以及试验室全基因组测序结果设计这三种病菌的特异性引物,建立常规PCR检测体系。根据自己设计并优化的引物,结合试验室前人的研究,建立2轮多重PCR检测体系,对人参种植土壤进行病原菌检测,为人参种植地块选择,人参病害的早期预防、诊断及防控提供可靠的技术支持。本研究主要取得的结果如下:1.建立了2种引起人参锈腐病的两种柱孢属真菌常规PCR分子检测技术,通过在NCBI上查找I.destructans和I.robusta的全基因序列,通过序列分析与比对,筛选出其共有基因和特有基因,设计出针对I.destructans和I.robusta的特异性引物8IC-F/R,该引物可以扩增出1262bp大小的条带,其灵敏度为100.0 pg·μL-1。该检测体系应用结果显示,人工添加孢子的土壤带菌检测灵敏度为10~3个孢子/g土壤,人工接种I.destructans孢子悬浮液,人参锈腐病的病情指数最高达44.95%,最低为12.16%。应用PCR检测方法检测到32份土壤样本中含有柱孢属真菌,检出率为35.95%。2.针对茄立枯丝核菌R.solani,建立常规PCR分子检测体系。通过在NCBI上查找R.solani的全基因序列,对序列分析与比对,筛选特有基因,设计出针对R.Solani的特异性引物RS1-F/R,该引物可以扩增出897bp大小的条带,其灵敏度为1.0 ng·μL-1。人工添加菌丝的土壤带菌检测灵敏度为10-2mg·g-1。土壤人工接种R.solani菌丝悬浮液,人参立枯病病情指数最高为71.88%,最低为14.65%。应用PCR检测方法检测到25份含有R.solani土壤样本,检出率为35.21%。3.针对人参根腐病优势致病菌F.oxysporum,建立了常规PCR分子检测体系。采用本试验室测得的该菌全基因组序列结合NCBI数据库,进行序列分析与比对,筛选特有基因,设计出针对F.oxysporum的特异性引物JB12-F/R,该引物可以扩增出574bp大小的条带,其灵敏度为100.0 pg·μL-1。人工添加孢子的土壤带菌检测灵敏度为10~2个孢子/g土壤。土壤人工接种F.oxysporum孢子悬浮液,人参根腐病病情指数最高为40.37%,最低为10.35%。应用PCR检测方法检测到39份土壤样本含有F.oxysporum的,检出率为41.05%。4.本研究中我们首次建立了2次多重PCR体系,可以检测出人参上种植土壤中是否含有R.solani、F.oxysporum、I.destructans、I.robusta、Botrytis cinerea、Phytophthora cactorum和Alternaria panax。利用引物组8IC-F/R、RS1-F/R和JB12-F/R建立第一次多重PCR检测方法,可以同时扩增Ilyonectria spp.、R.solani和F.oxysporum这三类病菌,可分别扩增出1262bp、897bp和574bp大小的条带,灵敏度为1ng·μL-1基因组DNA,能够在人参种植土壤中快速检测出是否含有Ilyonectria sp.、R.solani和Fusarium oxysporum。利用引物HM-00044F/R、YB-00394F/R和0446-F/R建立第二次多重PCR检测体系,可以同时扩增B.cinerea、P.cactorum和A.panax这三种病菌,可分别扩增出700bp、498bp和4500bp大小的条带,灵敏度为100 pg·μL-1基因组DNA,能够从人参种植土壤快速检测出其中是否含有B.cinerea、P.cactorum和A.panax。