胃癌患者外周血中黏膜相关恒定T(MAIT)细胞的频率、表型及功能研究

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目的探讨胃癌患者外周血中黏膜相关恒定T(MAIT)细胞的频率、表型及功能变化,以及其改变是否与化疗因素有关;探讨胃癌患者血清中MAIT细胞相关细胞因子和颗粒素酶-B(granzyme-B,Gr-B)水平的变化情况;探讨胃癌患者外周血MAIT细胞频率与其临床参数之间的关系,为胃癌免疫治疗T细胞的研究提供实验基础。方法收集临床胃癌患者及健康对照组的肝素化外周血约2ml,用密度梯度离心法(density gradient centrifugation)制备单个细胞混悬液(PBMCs),最后加入荧光抗体后行流式细胞术检测,测定外周血MAIT细胞的频率、CD4和CD8表型的改变以及PD-1等重要免疫表型的变化情况;并对部分样本用PMA+离子霉素进行体外刺激实验作MAIT细胞功能研究;另外,还将所收集的血液样本留取上清液,统一使用CBA(Cytometric Bead Array)试剂盒检测外周血血清中MAIT细胞相关细胞因子和Gr-B的水平及变化情况。结果1.健康成人群体中,MAIT细胞频率和绝对数随年龄的增加呈下降趋势(p<0.01,p<0.01),但其与性别(p=0.957,p=0.623)、是否伴Hp感染(p=0.255,p=0.089),以及BMI指数(p=0.128,p=0.084)等因素无关。2.与健康对照组相比,胃癌患者外周MAIT细胞频率与绝对数是下降的(p=0.001,p<0.001),且胃癌患者在一次化疗前后MAIT细胞的频率和绝对数无变化(p=0.81,p=0.519)。3.在MAIT细胞CD4和CD8的分型基础之上进行外周血MAIT细胞的频率分析,胃癌组与对照组比较,有变化的是胃癌未化疗群体CD4-MAIT细胞的频率低于健康对照(p=0.018),同时也低于胃癌已化疗群体(p=0.023);胃癌未化疗群体CD4-CD8+MAIT细胞频率低于健康对照(p=0.036);其余无变化。4.选取MAIT细胞重要免疫表型进行测定,只有PD-1表型在胃癌患者和HC两组中是有差异的(p=0.042),而CD69及Tim-3无差异(p=0.474,p=0.369)。5.功能研究中,胃癌患者外周血中IFN-γ+MAIT细胞(p=0.401)和TNF-α+MAIT细胞(p=0.332)的比例与对照组相比无变化,即胃癌患者外周血MAIT细胞分泌这两种细胞因子的功能无变化。6.此外,胃癌患者外周血MAIT细胞的比例与其肿瘤标志物CEA(p=0.401)、CA19-9(p=0.401)、CA72-4(p=0.401)的水平之间无相关性,与肿瘤分期之间也无相关性(p=0.624,p=0.484)。CBA结果显示,胃癌患者外周血中IFN-γ、TNF-α、IL-17和IL-2的血清浓度与对照组相比无改变,但是Gr-B的浓度是下降的(p<0.001)。结论1.MAIT细胞在胃癌患者的外周血中是减少的,可能与细胞耗竭有关;2.化疗因素对胃癌患者外周血MAIT细胞的频率无影响;3.MAIT细胞PD-1表型的表达水平在胃癌患者组较高;4.胃癌患者外周血MAIT细胞的功能不变;5.MAIT细胞也许可以成为胃癌免疫治疗研究的一个新的重要的方向。
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