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目的:星形胶质细胞(Ast)是中枢神经系统(CNS)中数量最多的细胞,具有多方面的功能。Ast活化是指数量增加,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达增强,并分泌多种细胞因子和生长因子等,对神经元的存活、突起的再生和神经系统功能的恢复有重要的影响。如何有效调控胶质细胞活化增殖,是目前国内外学者们关注的热点之一。本实验旨在经体外分离、培养纯化获得的高纯度新生鼠脑皮质星形胶质细胞,利用中药丹参的主要成分丹参酮IIA进行干预,观察星形胶质细胞活化增殖情况。用不同的药物,调节星形胶质细胞中cGMP浓度,观察相应的GFAP表达强度,研究星形胶质细胞cGMP与GFAP增殖的相互关系,探讨NO-sGC-cGMP信号转导途径与星形胶质细胞活化增殖机制。
方法:分离2天内新生SD大鼠大脑皮层细胞,用含20%新生牛血清的DMEM/F 12的培养基培养,经原代及传代培养,并以GFAP-FITC免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。待传代培养生长态势良好时,一部分随机分成4组,在不同时间段给予不同浓度丹参酮IIA进行干预,经流式细胞仪观察其增殖情况,另一部分随机分成8组,经相应药物(ODQ、IBMX)干预后,放射免疫测其cGMP浓度,同时免疫荧光测GFAP荧光强度OD值,代表GFAP表达强度,统计学作相关分析。
结果:原代及传代培养星形胶质细胞,经GFAP免疫荧光检测,其纯度可达96%以上。实验结果显示:在一定的范围内,随着丹参酮IIA浓度增加,处于G0/G1期细胞比例下降,S+G2+M期的比例相应增加。不同浓度非特异性磷酸二酷酶抑制剂IBMX抑制了cGMP的降解,使cGMP浓度增加,GFAP随着不同浓度IBMX变化表达量也不同,相关系数为0.95。用sGC选择性抑制剂ODQ干预后,随着cGMP浓度降低,GFAP表达量也随之降低,其相关系数为0.76。
结论:
1.丹参酮IIA可促进星形胶质细胞增殖活化。
2.cGMP浓度与GFAP合成呈高度正相关。结合NO-GC-cGMP信号传导途径,该途径可能对GFAP的合成具有调节作用。