论文部分内容阅读
蛋白酶激活受体(protease activated receptors,PARs)是丝氨酸蛋白酶受体,目前在人和小鼠体内共发现了四种PARs,分别为PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。它们的基因序列于1991、1994、1997和1998年被先后克隆出来。其中PAR-1是凝血酶和胰蛋白酶的受体,PAR-2是胰蛋白酶、类胰蛋白酶和弹性蛋白酶的受体,PAR-3是凝血酶受体,PAR-4是凝血酶和胰蛋白酶受体。很久以来就认识到肥大细胞分泌介质参与过敏反应。作为初级效应细胞,肥大细胞既参与急性过敏反应又参与慢性过敏反应。肥大细胞一旦被激活,即释放其已预先合成的和新产生的介质执行其生物学功能。这些介质包括组胺、肝素、蛋白酶以及一系列的细胞因子如IL-4、IL-5和IL-6等,这些细胞因子可以在生理和病理情况下参与调节细胞的生长、分泌和迁移等。有关PARs与过敏反应性疾病的研究发现,PARs尤其是PAR-2与过敏反应密切相关。一些过敏原如尘螨、蟑螂过敏原可以激活PAR-2。但通过疾病动物模型得到的实验结果却不尽相同：有些结果显示PAR-2激活引起呼吸道的过敏性炎症反应,有些则发现PAR-2的激活在过敏性疾病中起到保护作用。所以有待于进一步深入探讨PARs在过敏反应性疾病中的作用。虽然对于参与过敏反应的一些细胞如内皮细胞、上皮细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞等的PARs功能已经有所了解,然而对过敏性疾病的核心效应细胞—肥大细胞的PARs功能还知之甚少。因此本研究将进一步的探讨肥大细胞PARs的功能,为过敏性疾病发病机制的研究提供实验数据。一、蛋白酶激活受体在肥大细胞的表达用逆转录聚合酶链式反应、流式细胞术及免疫荧光细胞染色分析方法,在mRNA水平和蛋白水平检测PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4在小鼠肥大细胞MC/9和P815的表达。结果小鼠肥大细胞MC/9和P815在mRNA水平和蛋白水平均表达PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。结论肥大细胞MC/9和P815表达PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。二、丝氨酸蛋白酶对肥大细胞IL-4分泌的影响肥大细胞P815培养后用胰蛋白酶、类胰蛋白酶、凝血酶单独或与相应抑制剂凝血酶抑制剂、大豆胰蛋白酶抑制剂、α抗胰蛋白酶抑制剂、亮肽素结合处理肥大细胞,收集上清并用ELISA方法检测IL-4的水平。结果：胰蛋白酶和类胰蛋白酶能促进肥大细胞P815分泌IL-4明显增多(P<0.05)；大豆胰蛋白酶抑制剂和α抗胰蛋白酶能阻断胰蛋白酶引起的肥大细胞P815 IL-4分泌(P<0.05)；亮肽素能阻断类胰蛋白酶引起的肥大细胞P815 IL-4分泌(P<0.05),而凝血酶对肥大细胞P815分泌IL-4无明显影响(P>0.05)。结论：胰蛋白酶和类胰蛋白酶刺激肥大细胞IL-4分泌,而凝血酶对肥大细胞IL-4的分泌功能无影响。