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铜绿假单胞菌是医院内发生感染的主要原因,全球大约10%的医院内获得性感染是由铜绿假单胞菌引起的。近年来,对铜绿假单胞菌的关注不断增加,主要是通过研究某一个具体系统,例如群集感应系统,耐药性,生物膜等方面,但是缺少这些系统之间的联系的研究。因此,本课题以铜绿假单胞菌为研究材料,主要研究其与蛋白ExsA结合的基因。本论文在实验室前期工作基础上,主要对铜绿假单胞菌中调节因子ExsA的DNA结合序列及调节机制进行研究,通过ChIp-seq技术、MEME分析、EMSA鉴定、Lux荧光实验等方法,试图确定ExsA因子的DNA结合位点和调节机制,结果如下:(1)ChIP-seq的实验结果显示ExsA在铜绿假单胞菌基因组中有32个(结合峰强度t>1.97)强结合位点。(2)使用MEME对ChIP-seq的DNA序列进行分析,此次分析使用了五个motif,经比较a motif是最佳的,在所分析的32条序列中27条有此motif,ExsA结合的DNA序列A[TC]C[AG]G[GC][CTG][AC][TGC]AT[TA][CT][CA][TA]是此次分析的保守序列。(3)经EMSA实验鉴定,ExsA与PA3866、wbpG、wzZ、wzX和vqsM具有较强的结合能力,尤其是PA3866和wbpG与ExsA的结合能力最为显著且都有两条明显的结合带。(4)对wzZ的启动子进行序列对比发现,wzZ不仅在-10和-35存在保守序列,在-55区还又A碱基保守序列。(5)ExsA通过直接结合在基因PA3866的启动上,抑制PA3866的表达,进而抑制绿脓菌素的表达量。(6)在细菌实验可以看到,ExsA能影响铜绿假单胞菌的活性,进而影响细菌的毒性。