目的：肝脏缺血再灌注损伤常发生于肝切除、失血性休克、外伤及肝移植手术，病理生理过程极其复杂。如何减轻肝脏在缺血再灌注过程中的损伤，进而保护肝细胞的正常功能有着十分重要的临床意义。最近的研究发现细胞自噬参与缺血再灌注损伤过程，但是自噬对细胞的存活是利是弊仍未有定论。本研究拟从自噬活性调控方面探讨褪黑素对缺血再灌注损伤的HepG2细胞保护机制。　　方法：（一）细胞模型的制作及实验分组：1、缺血再灌注模型制作：选择状态良好的、80％生长融合的HepG2细胞进行试验，弃培养液，加入等量的PBS平衡液，置于通有5％CO2和95％N2的37℃培养箱中120 min，即模拟缺血120 min（缺血清、缺糖、缺氧，OGD），弃掉PBS平衡液，加入含或不含Mel或PDTC（NF-κB的抑制剂）的正常培养液继续培养0 h、1 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h，即模拟再灌注。2、实验分组：分为六组，（1）正常组（N组）；（2）缺血再灌注组（IR组）：HepG2细胞模拟缺血120 min，更换正常培养液继续培养0 h、1 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h。（3）Mel处理组（IRM组）：HepG2细胞模拟缺血120 min，再灌注时加褪黑素（100μmol/L）继续培养1 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h；（4）Mel预处理组（MIRM组）：HepG2细胞用Mel（100μmol/L）预处理12 h，模拟缺血120 min，再灌注时加Mel继续培养0 h、1 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h。（5）PDTC处理组（IRP组）：HepG2细胞模拟缺血120 min，再灌注时加PDTC（200μmol/L）继续培养1 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h；（6）PDTC预处理组（PIRP组）：HepG2细胞用PDTC处理12h，模拟缺血120 min，再灌注时加PDTC（200μmol/L）继续培养0 h、1 h、3 h、6h、9h、12h、24h；（二）样本采集：在不同时间点收集细胞提取胞浆蛋白和胞核蛋白。（三）Western blot检测蛋白表达：自噬相关蛋白—LC-3，Beclin1；核转录因子—NF-κBp65；以及MEK2。（四）MTT法检测细胞活力。　　结果：（一）Mel和IR对HepG2细胞NF-κBp65的表达和分布的影响：（1）缺血再灌注（IR组）对HepG2细胞总的p65表达没有影响，同正常组相比较p>0.05，差异无显著性；但是，胞浆中的p65水平随着再灌注时间的延长呈现出先降低后升高的变化趋势，再灌注1 h、3 h、6 h、9 h表达低下，与正常组相比较，p<0.05差异有显著性，再灌注12 h逐渐恢复至正常水平；胞核中p65水平则呈现先升高后降低的变化趋势，在再灌注0 h、1 h、3 h明显增高，与正常组相比较p<0.05，差异著性，再灌注6h后逐渐恢复至正常水平，结果表明缺血再灌注损伤在早期促进HepG2细胞胞浆中p65向胞核转位。（2）HepG2细胞IR后用Mel治疗（IRM组）结果显示，总的p65表达无变化，同IR组和正常组相比较p>0.05，差异无显著性；虽然胞浆中p65水平在再灌注6 h前有下降趋势，且同正常组相比较p<0.05，有显著性差异，但同IR组相比较，IRM组细胞胞浆p65水平明显高于同一时间点IR组；胞核中p65水平在再灌注6 h前高于正常组，但是低于同一时间点IR组p<0.05，差异具有显著性，结果表明Mel可以部分抑制缺血再灌注诱导的p65核转位。（3）如果先用Mel预处理HepG2细胞12 h，再进行IR和Mel治疗（MIRM组)，处理前后对HepG2细胞总的p65表达没有影响，同正常组相比较p>0.05，差异无显著性；胞浆中p65水平只在IR1 h前轻微下调，与正常组相比较，p<0.05，差异具有显著性，在IR3h后恢复至正常水平，与正常组相比较，p>0.05，差异无显著性，同IR组相比较，p<0.05，差异具有显著性；胞核中p65水平除了IR0 h、1 h明显高于正常组，其他各时间点与正常组比较无显著性差异，同IR组和IRM组比较，明显降低，p<0.05，差异具有显著性。结果表明Mel预处理比Mel治疗具有更好的抑制IR促进HepG2细胞p65核转位的作用。　　（二）Mel和IR对HepG2细胞自噬相关蛋白的表达的影响：（1）随着IR时间的延长，总的LC-3的水平和LC-3Ⅱ含量逐渐增加，与正常组相比有显著性差异（*p<0.05）；Mel治疗后各时间点的LC-3 II含量也明显高于正常组，＃＃p<0.01差异具有极显著性，但是同一时间点相比较，IRM略低于与IR组，特别是IR24 h，Mel显著抑制了LC-3Ⅱ升高（$p<0.05）。（2）随着IR时间的延长，Beclin1的表达逐渐增高，与正常组相比有显著性差异（*p<0.05）；Mel治疗后，Beclin1的表达在0 h、1 h、3 h略高于正常组（＃p<0.05），6 h后与正常组无差异，与IR组相比较，IR6 h前，两组各时间点之间变化无差异，但是IR9 h后，Mel组明显低于IR组，差异显著（$p<0.05）。结果表明Mel能有效抑制IR诱导的HepG2细胞发生过度自噬。　　（三）褪黑素和IR对MEK2表达的影响：随着IR时间的延长，MEK2的表达表现出先升高后下降的变化趋势，各时间点与正常组相比较，都显著性增加（*p<0.05），IR3h升高最明显。加入褪黑素后，IR3h的MEK2的表达水平明显降低，*p<0.05，结果表明Mel可以抑制IR促进HepG2细胞MEK2的表达。　　结论：（1）IR促进HepG2细胞NF-κBp65的核转位，而Mel可以抑制IR的作用，且Mel预处理作用效果强于Mel治疗。（2）IR促进HepG2细胞中LC-3Ⅱ和Beclin1的表达，从而促进自噬的发生，而Mel下调IR诱导的HepG2细胞中LC-3Ⅱ和Beclin1的表达，从而防止IR诱导的过度自噬的发生。（3）IR上调MEK2的表达，Mel抑制MEK2的表达。Mel可能是通过抑制NF-κBp65的核转位从而抑制了Beclin1介导的过度自噬从而发挥有效保护了缺血再灌注诱导损伤的肝细胞。