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目的:构建针对CD59基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,为下一步研究肿瘤细胞内CD59 RNAi奠定基础。利用本课题组设计并合成的CD59短肽封条,检测其对HeLa细胞凋亡的作用,为肿瘤的治疗提供一条新的思路。方法:根据GenBank提供的CD59基因mRNA的序列及siRNA的设计原则设计RNA干扰序列及一条对照序列,以CD59基因mRNA序列的220-238nt的19个bp片段作为靶序列,设计并合成两端含有酶切位点的60个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4连接酶连接至线性化的质粒pSUPER.retro.neo+GFP中,转化大肠杆菌JM109,提取质粒。然后通过酶切,PCR,测序鉴定重组质粒。50mg/L CD59短肽封条作用于HeLa细胞24h后,用透射电镜检测HeLa细胞的凋亡情况;用MTT的方法来检测HeLa细胞增殖抑制率;利用免疫组织化学方法检测survivin,caspase-3,bax的表达水平。结果:经酶切鉴定,PCR鉴定及测序结果表明成功地构建了CD59基因的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体。透射电镜结果表明,CD59短肽封条能使HeLa细胞的胞核发生碎裂。MTT实验表明转CD59基因的HeLa细胞+短肽的细胞组增殖抑制率大于HeLa细胞+短肽组（P＜0.01）。免疫组化实验显示,转CD59基因的HeLa细胞+短肽组和正常的HeLa细胞+短肽组相比较,survivin表达水平降低,差别有统计学意义（P＜0.05）;而caspase-3表达水平增高,差别有统计学意义（P＜0.05）;bax的表达量各组比较（P＞0.05）,差别无统计学意义。结论:酶切,PCR,测序鉴定成功地构建了CD59基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体。电镜,MTT实验及免疫组化实验显示,CD59特异位点的短肽封条具有下调survivin的表达,活化caspase-3,从而促进HeLa细胞的凋亡。我们的研究为CD59对肿瘤细胞凋亡信号转导的进一步研究奠定基础,为肿瘤的生物治疗提供一条新的思路。