VBNC状态大肠杆菌RT-PCR检测方法的建立

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenzi004
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细菌活的非可培养状态(viable but nonculturable state,VBNC)指细菌遭受不良环境条件下所表现出的一种适合他存活的策略,其表现为在传统的实验培养基上不能生长但仍然是活的并具有代谢活性,仍能够保持它的致病性或毒力基因,并且这种状态的细菌在适当的条件下可以恢复为可培养状态。在环境微生物质量评估中对于VBNC菌的检测是非常重要的,这不仅是因为细菌的致病性更重要的在于污染标准指示菌,如大肠杆菌.因此建立一种能够检测VBNC状态下的细菌并且能够确定它们的存活力是非常必要的。 本试验选取一株鹅源的大肠杆菌,一株貂体内的分离的大肠杆菌进行了活的非可培养状态诱导,将两株大肠杆菌悬浮于液体LB(PH2-3)中,置于4℃的低温静止培养,两株大肠杆菌均可进入活的非可培养状态。但因菌株不同进入VBNC状态的时间也不同,A142天,A255天。并连同早期已经诱导进入VBNC状态的两株大肠杆菌D1 D3进行核酸的提取,反转录,PCR阔增及其电泳分析,并且结合一些常规的检测。 菌经过寡营养的微生态环境下而诱导进入VBNC状态,在这过程中VBNC菌体的差异基因开始表达,并利用RT-PCR方法对其进行检测与代谢活性相关的mRNA的存在表明了VBNC状态下细菌的存活力。
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