黄秋葵组织培养及胚性细胞悬浮体系的建立

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黄秋葵学名Abelmoschus esculentus L.(Hibiscus esculentus L.),属锦葵科(Malvaceae)秋葵属(belmoschus Medicus)一年生草本植物。它既是营养丰富的保健型蔬菜,又是疗效显著的常用中药,还是观赏价值颇高的绿化、美化材料。随着对黄秋葵的营养价值及其药用价值认识的不断深入,应用前景日益广阔,需求量与日俱增,市场效益显著。因此对黄秋葵的组织培养技术的研究亦愈发得到重视,通过组织培养,获得优质材料,降低提取成本,为黄秋葵的利用提供参考。本研究以黄秋葵为试验材料,采用黄秋葵当年生茎段为外植体,诱导胚性愈伤组织,建立植株再生体系和胚性悬浮体系。获得试验结果如下:1、以黄秋葵茎段为材料,诱导产生了胚性愈伤组织,建立了高频再生体系。筛选出了黄秋葵外植体消毒灭菌的最佳处理组合为75%乙醇消毒30 S后,转入0.1%HgCl2溶液中消毒8 min。适于胚性愈伤诱导及扩增最佳培养基MS(NH4NO3/2)+2.0mg·L-12,4-D+3.0 mg·L-1ZT+3%蔗糖+0.7%琼脂。2,4-D在诱导胚性愈伤组织中是必需的。植物激素、氮源、糖源及光照条件对黄秋葵胚性愈伤组织形成有较大影响。2、以胚性愈伤组织为材料,建立了稳定的胚性细胞悬浮体系。试验结果表明培养时期悬浮细胞生长规律符合典型的“S”形生长曲线,其最佳继代周期为4~8 d。培养期悬浮细胞干重和pH之间、振荡培养转速和悬浮细胞形态之间都有一定的相关性。接种量和AgN03含量对悬浮细胞的生长有影响:最佳接种量为1.5%,最适AgN03浓度为5.0mg·L-1。3、通过对胚性愈伤组织的分化培养,获得黄秋葵再生植株。筛选出黄秋葵不定芽的诱导培养基为MS+3.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-12,4-D+3%蔗糖+0.7%琼脂;壮苗培养基:MS+1.5 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-1GA3+3%蔗糖+0.7%琼脂;生根培养基:1/2MS+0.1 mg·L-1NAA。炼苗和移栽是提高黄秋葵移栽成活率的关键。自然光室温条件下炼苗7 d,然后打开瓶盖炼苗3 d。用腐质土:河沙:蛭石=1:1:1的混合物作为培养组培苗的基质利于组培苗成功移栽。
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