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[目的]卵巢癌是女性生殖系统常见的肿瘤之一,其发病率列居女性生殖系统恶性肿瘤第三位,仅次于子宫颈癌和子宫体癌。但卵巢癌致死率却居妇科恶性肿瘤之首,严重威胁着女性的生命与健康,因此探究卵巢癌的发病分子机制成为妇科肿瘤研究的热点之一。新近研究发现：脂肪酸合酶(Fatty acid synthase, FASN)和人类表皮生长因子受体-2((human epidermal growth factor receptor-2, HER2)在多种肿瘤的发生、发展过程中起重要作用,它们能够单独或联合调控肿瘤的发生、发展,其作用可能通过磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B (Phosphoinositide 3-kinase/Protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路介导实现。我们的前期的预实验结果显示：FASN和HER2表达水平与卵巢癌间存在一定的相关性,FASN和HER2交互作用是否通过PI3K/Akt信号通路介导并影响卵巢癌的发生、发展及其机理迄今未见报道。本研究初步探讨FASN和HER2表达与卵巢癌的临床病理及预后相关性,并利用分子生物学相关技术,探究PI3K/Akt信号通路介导FASN和HER2交互作用在卵巢癌的发生、发展过程中的相关性,以期为卵巢癌的诊治寻找新的分子靶点提供实验依据和理论基础。[方法]1.经东南大学附属中大医院伦理学委员会同意,收集东南大学附属中大医院卵巢癌患者的标本进行本实验研究,所有标本均取自术前未经放化疗的患者且经病理学确诊。然后应用组织芯片技术检测FASN和HER2在卵巢癌中的表达,结合患者随访结果分析FASN和HER2的表达与患者生存期、预后的关系。2.应用qPCR和Western Blot技术检测人卵巢癌细胞SKOV3、SKOV3/DDP及A2780中HER2和FASN的表达。3.分别构建HER2和FASN干扰质粒,并对HER2和FASN高表达的A2780卵巢癌细胞株进行转染；qPCR筛选干扰效率高的干扰质粒并建立稳定转染FASN和HER2的细胞株。4. qPCR, Western Blot鉴定稳定转染HER2和FASN干扰质粒的卵巢癌A2780细胞株,并检测其细胞增殖能力、侵袭力以及凋亡变化。同时,进一步检测稳转株中PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。5.应用PI3K特异性抑制剂(ZSTK474)作用于靶细胞,检测其对PI3K/Akt信号通路活性、HER2和FASN表达的影响,探讨其相关性。6.观察PI3K特异性抑制剂对卵巢癌细胞周期、凋亡、克隆形成能力及侵袭力等生物学行为的影响。[结果]1.人卵巢癌组织中,FASN阳性表达率为70.53%(67/95),FANS阳性表达与肿瘤分级以及FIGO分期间具有明显的相关性(P<0.001); HER-2阳性表达率为33.68%(32/95),其阳性表达与患者的年龄、肿瘤组织分型、分级、残余肿瘤及FIGO分级均无显著性差异(P>0.05)。两组中,同时高表达FASN和HER-2的卵巢癌患者较高表达FASN和低表达HER-2的卵巢癌患者预后更差。2.人卵巢癌细胞SKOV3、SKOV3/DDP及A2780中HER2和FASN mRNA及蛋白的表达结果显示：A2780中FASN、HER2蛋白的表达均高于SKVO3DDP和SKVO3,具有统计学差异(P<0.05),故选取A2780细胞作为后续研究的靶细胞。3.将干扰效果最佳的HER2和FASN干扰质粒以及对应的空载干扰质粒分别转染入A2780细胞,分别建立稳定转染HER2和FASN干扰质粒的A2780细胞株。与空白组和对照组相比,干扰组的HER2和FASN mRNA表达及蛋白表达明显减低,(P<0.05)。干扰A2780细胞HER2和FASN表达可显著抑制肿瘤细胞的克隆形成能力和侵袭能力,同时诱导凋亡蛋白Bax的高表达,与其它对照组相比具有统计学意义(P<0.05)。4.A2780细胞中,分别转染HER2和FASN两个干扰质粒后PI3K/Akt信号通路的活性明显受抑制。5. PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂(ZSTK474)作用A2780细胞后,明显抑制靶细胞的PI3K/Akt信号通路活性,下调HER2和FASN基因和蛋白表达,与其它对照组相比均具有统计学意义(P<0.05)。ZSTK474能够将A2780细胞阻滞在G1期,减少其S期的比例,同时诱导A2780细胞的凋亡,与其它对照组比较均具有统计学意义(P<0.05)。A2780细胞的生物学行为同样显示,ZSTK474能够降低A2780细胞的克隆形成率和细胞侵袭能力,与其它对照组比较均具有统计学意义(P<0.05)。[结论]1.卵巢癌组织的FASN和HER2同时高表达与卵巢癌患者的生存期、预后具有明显的负相关性。2. RNAi技术成功下调了卵巢癌A2780细胞中HER2和FASN的表达,影响了卵巢癌A2780细胞的恶性生物学行为,而HER2和FASN之间可能存在交互作用,该交互作用可能通过PI3K/Akt信号通路介导。3. PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂(ZSTK474)可降低卵巢癌A2780细胞PI3K/Akt信号通路的活性,下调卵巢癌A2780细胞HER2与FASNmRNA和蛋白的表达,抑制卵巢癌A2780细胞的恶性生物学行为。研究结果显示：PI3K/Akt信号通路介导FASN和HER2交互作用可能调控卵巢癌的恶性表型,影响卵巢癌的发生、发展以及患者预后。