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本课题主要针对于非自然金属酶的发展,建立一个便宜、简便的方法来生产高产量的识别(R)-/(S)-BINOL单链克隆抗体。
本实验利用新方法,以噬菌体展示技术把过渡金属作为小抗体片段,从而产生一种新的人工合成的具有高效率、高稳定性和选择性的水溶性金属酶。
本实验把编码(R)-/(S)-BINOL蛋白基因亚克隆到大肠杆菌表达系统中,以期获得高效表达。通过噬菌体展示技术筛选出能结合(R)-/(S)-BINOL蛋白抗原的11个抗体片段,并对其进行测序分析。将CDR区域和基因片断与数据库VBASE.进行比较后得到了一种抗体片段与抗原结合相互作用的三维模型。
通常在大肠杆菌中表达为融合蛋白,所以本实验通过选择不同的菌株、温度、融合蛋白和重折叠策略实验,解决在大肠杆菌中的可溶性高效表达,使所有的抗体片段都作为包含体表达。通过与细菌起始因子IF2的区域Ⅰ的融合导致抗体片段的高度表达,并且能够获得与抗原高度亲和性的蛋白。