南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)是一种经由迁飞性昆虫白背飞虱(Sogatella furcifera)以持久性循回增殖型方式传播的病毒。SRBSDV入侵白背飞虱体内后,需要借助介体体内相关蛋白来完成病毒基质的合成,进而得以复制和增殖。研究表明,SRBSDV编码的非结构蛋白P5-1是病毒基质的重要组份。因此,为了探索虫体内与病毒P5-1互作的蛋白组份及其在病毒复制中的功能,本文以病毒P5-1作为诱饵蛋白,采用酵母双杂交技术对白背飞虱的cDNA文库进行筛选,并得到了2个与P5-1互作的蛋白:核糖体蛋白L12(ribosomal protein L12)与烯醇酶(Enolase)。之后,经由PCR扩增得到这两个蛋白的基因全长序列,通过酵母双杂交与双分子荧光互补实验,证实了P5-1与它们的互作关系。进一步地,通过RT-qPCR检测分析了这两个蛋白编码基因在带毒和无毒白背飞虱体内表达水平的差异,为深入解析介体蛋白在病毒基质形成过程中的作用奠定了基础。主要研究结果如下:1、分析了病毒非结构蛋白P5-1的结构及功能。采用生物信息学方法揭示,P5-1较为稳定,一级结构中包含有入核功能域及多个蛋白互作位点,互作位点主要集中在338-499 aa区域;以SWISS MODEL构建的三维结构模型显示,该蛋白含有较多螺旋结构和折叠结构,内部包含多个可能作为小分子物质运输通道的孔洞。2、筛选并验证了两个与P5-1互作的白背飞虱蛋白。采用酵母双杂交技术从白背飞虱cDNA文库中筛选到两个与P5-1互作的蛋白:核糖体蛋白L12(ribosomal protein L12)和烯醇酶(Enolase);克隆了这两个蛋白基因全长序列;酵母回复试验及双分子荧光互补试验证实了这种互作;生物信息学分析揭示,核糖体蛋白L12具有5个蛋白结合位点和2个DNA结合位点,推测该蛋白被P5-1招募后参与病毒RNA复制、蛋白质合成,并调控寄主细胞发育等生理活动;烯醇酶含有17个蛋白结合位点和1个DNA结合位点,推测该蛋白被P5-1招募后参与对虫体免疫反应的调控,帮助病毒突破虫体内的免疫防线,顺利完成复制。3、明确了与P5-1互作的两个白背飞虱蛋白在受病毒侵染后的表达特征。RT-qPCR检测结果表明,受SRBSDV侵染后,白背飞虱体内核糖体蛋白L12的表达量显著提高,但烯醇酶的表达量变化不大。4、提出了P5-1蛋白在病毒复制过程中的功能模型。根据本研究及前人研究结果,推测在SRBSDV基质的合成过程中,P5-1可能先招募病毒P6与P9-1,再招募寄主核糖体蛋白L12和烯醇酶,实现病毒复制功能,其中核糖体蛋白L12参与病毒的复制、转录及蛋白质的合成,而烯醇酶则可能参与防御虫体免疫反应,帮助病毒顺利完成复制。