γ-羟丁酸钠对人胶质瘤细胞SHG-44放疗增敏的实验研究

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目的:探讨γ-羟丁酸钠(gamma-hydroxybutrate,GHB)对胶质瘤细胞SHG-44增殖抑制及放疗增敏机制研究。方法:以SHG-44细胞为研究对象,MTT法检测不同浓度GHB(2.5mmol/L、5mmol/L、7.5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L)作用人胶质瘤细胞不同时间(24h、48h、72h)细胞增殖抑制率。Hoechst33258实验观察不同浓度GHB(5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L)作用24h后细胞核变化。下列实验分为对照组、药物组、照射组、联合组(照射+药物)。流式细胞术(FCM)分析各组细胞周期、凋亡情况。克隆形成实验分析GHB联合不同剂量的X线照射对细胞存活率的影响,拟合存活曲线。细胞免疫荧光检测SHG-44细胞中HDAC1(Histone deacetylase1,HDAC1)mRNA表达情况。RT-PCR检测各组细胞HDAC1mRNA、ATM (Ataxiatelangiectasia-mutated gene)mRNA的转录水平。结果:MTT实验显示GHB明显抑制SHG-44细胞的生长,呈浓度和时间依赖性。Hoechst33258镜下观察时染色体浓缩,见强蓝色荧光。FCM检测联合组细胞周期S期细胞减少,G0/G1期细胞增多,凋亡显著。克隆形成实验显示联合组的D0、Dq及SF2各值低于照射组(1.764Vs2.237,1.251Vs1.873,0.561Vs0.769),联合组SER为1.27。细胞免疫荧光测得HDAC1主要在SHG-44细胞核中表达。RT-PCR结果表明γ-羟丁酸钠能抑制HDAC1mRNA、ATM mRNA表达。结论:GHB通过诱导细胞凋亡,改变细胞周期,抑制肿瘤细胞损伤修复,抑制HDAC1、ATM mRNA表达,从而增强胶质瘤细胞放射敏感性。
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