禽大肠杆菌病(Avian colibacillosis)是指部分或全部由禽病原性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli, APEC)引起的局部或全身性感染的疾病,主要包括大肠杆菌性败血症、大肠杆菌肉芽肿(Hjarre氏病)、滑膜炎、气囊病(慢性呼吸道病,CRD)、腹膜炎、输卵管炎、禽蜂窝织炎、肿头综合症、全眼球炎及脐炎／卵黄囊感染等。该病给世界范围内养禽业带来了严重的经济损失。研究表明,ompT基因编码外膜蛋白酶,cvaC是大肠杆菌素V的结构基因,流行病学调查发现,ompT、cvaC基因在有毒力菌株中的阳性率很高。本研究旨在研究ompT、cvaC基因与致病性之间的关系,了解APEC ompT与cvaC基因突变株的生物学特性,为揭示APEC的致病机理及进一步构建APEC弱毒疫苗株奠定基础。本试验运用同源重组的方法构建ompT和cvaC的基因缺失突变株。首先PCR扩增ompT和cvaC基因,并将其插入到pMD(?)18-T simple vector载体,再运用分子克隆的方法将Zeocin抗性基因分别插入到目的基因ompT和cvaC中,构建出带Zeocin抗性基因标志的载体T-ompT-Zeo和T-cvaC-Zeo,最后PCR扩增片段ompT-Zeo和cvaC-Zeo,并电转化禽致病性大肠杆菌分离株E058,筛选出E058突变株E058AompT及E058AcvaC。Southern blot结果显示Zeocin抗性基因片段单拷贝插入；RT-PCR结果表明突变株的ompT基因及cvaC基因不能转录,但其上下游基因的转录正常；生长曲线测定结果显示,突变株E058△ompT及E058△cvaC的生长速度与亲本株E058相似,并未表现出明显差异；SPF鸡血清杀菌试验、HD11细胞吞噬试验、12日龄SPF鸡胚致死试验结果说明,与野生株E058相比,突变株E058△ompT及E058△cvaC只表现出了轻微致弱；E058、E058AompT、和E058△AcvaC的半数致死量(LD50)为分别为104.4、106.0和105.1CFU；体内竞争及动态分布试验表明,与野生株相比,突变株E058△ompT在各个被检脏器中数量均明显下降,差异显著,而E058△cvaC在部分被检脏器中数量有所下降,但并未达到显著水平,差异不显著。结果表明,E058△ompT突变株较野生株毒力下降明显,E058△cvaC突变株毒力较野生株相比没有明显的差异,从而表明ompT基因与APEC E058株的致病性有关,cvaC与APEC E058株的致病性不相关。