【摘 要】
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目的：采用RNAi技术研究小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)对人喉鳞癌Hep-2细胞系c-myc癌基因表达的干扰效应，了解siRNA靶向人c-myc基因对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生长增殖的
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目的：采用RNAi技术研究小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)对人喉鳞癌Hep-2细胞系c-myc癌基因表达的干扰效应，了解siRNA靶向人c-myc基因对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生长增殖的抑制作用，以及筛选出特异的人c-myc siRNA序列，为喉癌的基因治疗提供有效的理论基础。方法：1．根据siRNA的设计原则及人c-myc基因的标准序列，选出三个位点的干扰序列。将对数生长期Hep-2细胞系转染siRNA 48小时后开始观察和检测三个位点RNA干扰的效果。2．利用荧光定量RT-PCR实验和MTT实验分别从mRNA表达水平及细胞表达水平，观察siRNA对喉鳞癌Hep-2细胞中c-myc癌基因抑制的定量研究。3．利用相差显微镜，细胞爬片HE染色及透射电镜观察siRNA对喉鳞癌Hep-2细胞中c-myc癌基因抑制的形态学情况。结果：1．实时定量PCR实验结果显示转染组与阴性对照组和空白对照组比较，Hep-2细胞中c-myc mRNA表达明显减弱，其中S3组对c-myc mRNA抑制率达94％。MTT实验结果显示人c-myc基因siRNA能有效抑制喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的增殖，其中S3组细胞的存活率为对照组的77％。2．形态学结果显示人c-myc siRNA能有效抑制喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖，肿瘤细胞异型性减少，超微结构可见转染组细胞凋亡较空白组明显。结论：1．从mRNA水平及细胞水平c-myc siRNA都能有效抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖。2．抑制c-myc基因的表达能够抑制Hep-2细胞的增殖，并诱导细胞凋亡。提示c-myc基因可以作为肿瘤基因治疗的靶位点。
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