鲫鲤杂交鱼Mlh1基因遗传和表达研究

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减数分裂重组过程中异源双链DNA形成过程中产生错配后,减数分裂错配修复机制对维持减数分裂正常进行起到至关重要作用,Mlh1基因参与减数分裂第一次分裂同源染色体的重组交叉,是研究减数分裂特征的重要标记因子。具有异源染色体组的远缘杂交鱼的减数分裂过程是一个值得关注的问题。本研究以已经形成稳定品系的鲫鲤杂交鱼为研究对象,包括鲫、鲤、鲫鲤F1、异源四倍体鲫鲤等,采用分子克隆技术、Q-PCR技术、Western Blot技术、免疫组织化学检测等方法研究了Mlh1在鲫鲤杂交鱼中的遗传和表达特征,并分析了他们与原始父母本之间的关系,所得的结果与结论如下:(1)红鲫和鲤Mlh1基因的完整CDS序列全长分别为2175bp、2172bp,CDS序列比对结果认为原始红鲫与鲤基因序列存在稳定的差异,即红鲫Mlh1的CDS序列比鲤CDS序列最大差异性表现在缺少片段TAGTTCCTC,对子代鲫鲤F1、异源四倍体鲫鲤均获取不同类型Mlh1基因的CDS序列,根据是否有片段TAGTTCCTC分为红鲫型2175bp(F1-1、4nAT-1)与鲤型2172bp(F1-2、4nAT-2)。但是后代红鲫型2175bp(F1-1、4nAT-1)与鲤型2172bp(F1-2、4nAT-2)与原始父母本遗传特性并不完全一样,存在少量突变,且遗传变异位点存在不规律性和随机性。(2)根据前面所得四种鱼Mlh1基因的CDS序列,对其共同保守区设计引物进行克隆序列,对母本红鲫、父本鲤和鲫鲤杂交品系鱼的Mlh1基因部分DNA序列进行体外扩增,得到多片段序列并对片段序列进行拼接。得到红鲫Mlh1部分DNA拼接长度为4696bp,其中包含16段外显子序列。得到鲤Mlh1部分DNA拼接长度为4106bp,其中包含13段外显子序列。得到鲫鲤F1、异源四倍体鲫鲤Mlh1部分基因均有红鲫型、鲤型两种类型,分别包含16段外显子、13段外显子。部分内含子序列以及外显子序列分析初步表明鲫鲤F1、异源四倍体鲫鲤Mlh1基因均有鲫型、鲤型两种类型,没有发现原始父母本之间的基因嵌合现象但存在少量变异。(3)Q-PCR技术测得,以处在繁殖季节前期红鲫为对照,处在相同季节的异源四倍体鲫鲤的基因表达量相差不大,为红鲫Mlh1基因表达量1.307倍;而处于相同时期的鲤、鲫鲤杂交鱼F1表达量表现出较大的差异,分别是红鲫Mlh1基因表达量的4.988、16.652倍,结合组织学切片结果分析表明,该差异性与初级精母细胞含量比例呈正相关,即初级精母细胞比例高时,相应Mlh1基因表达量高,从而得知鲫鲤杂交鱼F1精子发生大量被阻滞在初级精母细胞时期。(4)Western Blot及免疫组织化学检测表明Mlh1蛋白在初级精母细胞中相对丰度表达,可做为一类蛋白标记深入研究杂交鱼的生殖细胞发育特征。该研究首次分析了远缘杂交鱼减数分裂关键基因遗传特征和相关功能参数,对鱼类远缘杂交的遗传进化研究及鱼类遗传育种实践方面具有重要的意义。
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