SD大鼠脊髓损伤后微环境的模拟实验研究(骨鞘相关抑制因子的表达)

来源 :四川医科大学 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bluecluse
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:(1)观察SD(Sprague-Dawley)大鼠在不同致伤势能的Allen's模型和脊髓全切模型的微环境中不同时间点的髓鞘相关抑制因子的表达。(2)探讨SD大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后的脊髓提取液模拟髓鞘相关抑制因子对轴突生长抑制微环境的最佳时间点。方法:(1)选择125只成年雌性健康SD大鼠,随机分为A组(假手术组,25只);B组(20g×5cm,25只);C组(20g×10cm,25只);D组(20g×15cm,25只);E组(脊髓全切组,25只)。(2)在制模成功后第1d、5d、7d、14d、28dBBB后肢运动功能评分、MEP电生理监测、病理切片鉴定、观察各组大鼠脊髓损伤程度;Western Blot印迹分析、RT-PCR检测髓鞘相关抑制因子(Nogo-A、MAG、OMgp)的表达。(3)本次实验数据的计量资料均用(x)±s表示,采用SPSS19.0软件包处理,各个组间比较使用方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。  结果:(1)整个实验中SD大鼠死亡24只,其中B组2只,死亡率为8.33%;C组死亡4只,死亡率为16.67%;D组8只,其中尿路感染死亡2只,术后出现血尿1只,死亡率为33.33%;E组,死亡10只,其中尿路感染死亡4只,出现血尿3只,死亡率为41.67%,E组的死亡率和并发症最高。(2)造模后,每个组的BBB评分均降低,A组SD大鼠仅表现为行走轻度障碍和肢体协调性欠佳,第5天后恢复正常;D、E两组大鼠损伤后双后肢全瘫,所有手术组SD大鼠均随着时间延长BBB评分逐渐增高。1d,5d,7d,14d,28d各组BBB评分,A组:19.89±0.57分,20.51±0.49分,21分,21分,21分;B组:2.94±0.57分,5.88±0.84分,8.46±0.76分,14.12±0.35分,15.34±0.76分;C组:1.72±2.12分,4.28±1.46分,6.02±1.38分,10.33±1.40分,11.28±3.42分;D组:0.00±0.00分,0.84±0.75分,1.25±0.78分,3.50±1.51分,4.31±2.32分;E组:0.00±0.00分,0.89±0.39分,1.35±0.97分,2.45±0.75分,4.42±1.93分。B组、C、组、D组、E组与假手术A组在对应时间点之间比较,差异有统计学意义(P<0.05),D组和E组在对应时间点之间比较差异无统计学差异(P>0.05)。(3)组织学检查:A组早期出现神经元水肿,其它时间点细胞数量无异常改变。B、C、D、E组在伤后24小时病灶处出现炎性细胞浸润,神经元细胞肿胀明显,随着时间推移,神经细胞减少;伤后28天发现大量星形胶质细胞增生,瘢痕及脊髓空洞形成,D、E组明显重于B、C组。(4)伤后各组的1d、5d、7d、14d、28dMEP潜伏期,A组:2.24±0.15ms,2.28±0.14ms,2.35±0.07ms,2.33±0.12ms,2.41±0.04ms;B组:3.83±0.16ms,3.51±0.15ms,2.33±0.14ms,2.28±0.16ms,2.50±0.12ms;C组:4.32±0.11ms,4.13±0.29ms,3.63±0.28ms,3.49±0.17ms,3.35±0.05ms;D组:4.74±0.22ms,4.44±0.06ms,4.48±0.25ms,4.61±0.11ms,4.72±0.51ms;E组:4.75±0.32ms,4.41±0.07ms,4.53±0.01ms,4.71±0.09ms,4.69±0.34ms。B组、C、组、D组、E组与假手术A组在对应时间点间比较,p<0.05;各组内后一时间点与其前一相邻时间点比较,p<0.05; D组和E组在对应时间点之间比较差异无统计学意义(p>0.05)。(5)Western blot检测,1d、5d、7d、14d、28dMAG相对量表达,A组:0.324±0.084,0.334±0.054,0.413±0.032,0.389±0.032,0.404±0.043;B组:0.413±0.092,0.494±0.132,0.599±0.134,0.494±0.133,0.396±0.098;C组:0.436±0.123,0.496±0.136,0.602±0.145,0.598±0.034,0.401±0.143; D组:0.514±0.137,0.594±0.184,0.798±0.139,0.710±0.032,0.405±0.039;E组:0.503±0.157,0.589±0.096,0.801±0.147,0.765±0.098,0.423±0.119。1d、5d、7d、14d、28d Nogo-A相对量表达,A组:0.334±0.076,0.367±0.045,0.423±0.031,0.387±0.041,0.463±0.037。B组:0.401±0.184,0.501±0.134,0.593±0.118,0.398±0.123,0.384±0.124;C组:0.424±0.163,0.474±0.125,0.674±0.136,0.584±0.032,0.414±0.025;D组:0.513±0.141,0.574±0.164,0.794±0.129,0.714±0.105,0.494±0.098;E组:0.515±0.098,0.585±0.174,0.807±0.105,0.736±0.038,0.485±0.032。1d、5d、7d、14d、28d OMgp相对量表达, A组:0.303±0.084,0.312±0.105,0.323±0.132,0.337±0.021,0.298±0.134。B组:0.473±0.132,0.678±0.142,0.584±0.104,0.403±0.098,0.394±0.132;C组:0.485±0.174,0.732±0.103,0.641±0.098,0.492±0.132,0.401±0.132;D组:0.532±0.134,0.814±0.093,0.703±0.032,0.501±0.134,0.432±0.125; E组:0.541±0.133,0.796±0.113,0.705±0.141,0.534±0.132,0.395±0.023。检测结果显示B、 C、 D、E组脊髓损伤后1天即可见Nogo-A、 MAG、 OMgp的表达,Nogo-A的表达强度在脊髓损伤后第5d开始上升,呈递增趋势,第7d表达最高,14d后逐步降低,第28天逐渐恢复到假手术组水平,以D、E两组表达最高;MAG在7d后达到高峰,到28d后逐渐恢复到假手术组水平。OMgp脊髓损伤后1天即可见到髓鞘中OMgP的表达,第5天达到高峰,第28d后逐渐恢复至假手术组水平。(6) RT-PCR检测:Nogo-AmRNA在1d、5d、7d、14d、28d相对量表达,A组:1.0054±0.0042,1.0049±0.0038,1.0019±0.0040,1.0023±0.0037,1.0040±0.0028。B组:0.8600±0.0034,1.2557±0.0029,1.3097±0.0042,1.2708±0.0028,0.8693±0.0018;C组:0.8958±0.0013,1.3177±0.0016,1.4817±0.0021,1.3351±0.0019,0.8961±0.0011;D组:0.9451±0.0010,1.4253±0.0012,1.5452±0.0023,1.3933±0.0019,0.9394±0.0023;E组:1.0567±0.0021,1.5925±0.0023,1.7734±0.0017,1.6650±0.0025,1.0063±0.0026。 MAGmRNA在1d、5d、7d、14d、28d相对量表达为,A组:1.0045±0.0015,1.0001±0.0017,1.0047±0.0021,1.0017±0.0023,1.0019±0.0024。B组:0.9651±0.0019,1.0455±0.0023,1.0903±0.0018,1.0143±0.0026,0.9986±0.0025。C组:1.0233±0.0017,1.1732±0.0019,1.2075±0.0018,1.1843±0.0023,1.0360±0.0027。D组:1.0537±0.0019,1.2395±0.0025,1.4250±0.0028,1.243±0.0019,1.0744±0.0026。E组:1.0780±0.0016,1.3170±0.0024,1.5045±0.0028,1.3239±0.0029,1.1280±0.0034。 OmgP mRNA在1d、5d、7d、14d、28d相对量表达为,A组:0.5001±0.0018,0.5093±0.0021,0.5016±0.0020,0.5012±0.0018,0.5013±0.0017。B组:0.5335±0.0021,0.5653±0.0018,0.5638±0.0021,0.5400±0.0023,0.5324±0.0024;C组:0.5919±0.0018,0.7059±0.0021,0.6425±0.0020,0.6104±0.0029,0.5882±0.0028;D组:0.6488±0.0018,0.8545±0.0030,0.8085±0.0019,0.6705±0.0034,0.6340±0.0019;E组:0.6787±0.0015,0.9030±0.0021,0.8675±0.0026,0.7269±0.0023,0.6661±0.0024。手术组B、C、D、E组Nogo-A、 MAG在第5天的相对表达量与本组其他时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05),D组与E组同一时间点的相对表达量比较无差异(P>0.05)。 OMgp在第7天的相对表达量与本组其他时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05),D组与E组同一时间点的相对表达量比较无差异(P>0.05)。Nogo-A、MAG、OMgp在SCI后的病灶中心明显上调,第1天可检测到表达,Nogo-A和MAG在第7天达到峰值,OMgp在第5天后达到高峰,28天后逐渐恢复到假手术组水平,以D组、E组两组表达最高。  结论:(1)致伤势能为20g×5cm,20g×10cm,20g×15cm,可模拟SD大鼠轻、中、重度脊髓损伤模型的微环境;不同势能的改良Allen's模型较脊髓全切模型的死亡率和并发症低,更适合基础实验研究。(2)Nogo-A、MAG、OMgp在不同致伤势能的Allen's模型和脊髓全切模型中均有表达,损伤势能越大,表达越高,且脊髓全切模型组(E组)与脊髓重度损伤组(D组)的表达无差异。脊髓损伤后5-7天的脊髓提取液可以模拟髓鞘相关抑制因子对轴突生长抑制的微环境。
其他文献
随着“微”时代的来临,微视频也逐渐深入到中学教育当中,因其“短”“精”而又不失趣味深受师生青睐。本文主要阐述微视频在高三化学复习作用。
2017高中生物生物学课程标准明确提出,从生命观念、科学思维、科学探究、社会责任等方面发展学生的核心素养,让学生能够深刻理解和应用重要的生物学概念,发展生物学科核心素养。
车灯将前方的路照得雪亮.rn这是一个春寒料峭的夜晚,她驾车沿着公路中心线行驶在松林间.路面湿漉漉的,雷克萨斯车不时左右摇摆.她也不知道自己和唐纳德究竟是喝掉了两瓶还是
期刊
我们在清理外公的房子.他前一天去世了,妈妈想要对这栋破败不堪的房子来一次大扫除.房子年久失修,墙上的油漆斑驳脱落,地板也腐烂得不成样子了.rn“这样做不好吧.”我有点不
期刊
那儿处于从轻轨站到湖岸不远的位置,他俩想在此度过一天.起初他们只听到苍蝇的嗡嗡声.“别动!”他突然握紧她的手说道.那个男人脸朝下趴在草丛中.两人并没有惊叫,周围环境依
期刊
“凯马特的顾客们请注意了,”卖场喇叭里传出沙哑的声音,“我们很高兴欢迎新生代的代言人,畅销书作家凯文·丹格勒来店里为他的最新力作《扭曲的床单》签名售书,地点在14通道
期刊
黄金国际市场上 ,英国和瑞士通过抛售储备黄金来控制黄金价格上涨。从 4月中旬开始 ,纽约期货市场上黄金近期价格持续低于每盎司 2 80美元。中央银行抛售储备黄金对市场心理
最近,我们对基层团组织建设情况作了专题调研,总的感到,近年来各级认真贯彻军委总部和军区的指示要求,共青团工作不断得到加强,在有效履行强边固防核心使命中发挥了重要作用
7月一个闷热的午后,记者们焦急地等着加哈根的出现.他们没有等太久,因为加哈根就住在离这儿不远的一家小旅馆里.说他“住”在那里其实是不准确的,24年来他只是在那里解决睡觉
期刊
为探究土体干密度和含水率对锚杆锚固体-红土界面剪切特性的影响,研制了一种钻孔成孔的锚杆单元体试样制作装置.制备了6组不同土体含水率、不同干密度的红土锚固单元体试样,