急性呼吸道感染(acute respiratory tract infection，ARTI)为临床常见病和多发病，其中约70～80％为病毒感染，主要有流感病毒，副流感病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒等，且人群普遍易感[1-4]。随着全球气候变化及环境污染等诸多因素的影响，近几年呼吸道病毒流行呈活跃势态。2003年由冠状病毒引起的以肺炎为主要表现的严重呼吸道综合症(SARS)[2-3]，2005年由高致病性禽流感病毒(H5N1)引起的呼吸道疾病，特别是2009年由新甲型流感病毒(novel H1N1)引起的世界范围内的流感大流行，导致大量的人员死亡和财产损失[4-7]。这些呼吸道病毒的抗原发生变异，使其容易有效地突破人群的免疫屏障，引起呼吸道感染疾病的流行[8]，因此对呼吸道病毒的监测及其抗原变异的探讨研究对呼吸道感染的防治具有重要意义。　　目的：　　1、调查2009-2010年发热呼吸道症候群7种病毒（人流行性感冒病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、人偏肺病毒、人腺病毒、人冠状病毒和人博卡病毒）感染情况;了解本省发热呼吸道病毒感染的流行病学特征;明确影响发热呼吸道病毒检出率的影响因素，为发热呼吸道病毒的有效防控提供科学依据。　　2、通过对新甲型H1N1流感病毒的血凝素抗原(HA)片段进行核苷酸序列测定，分析新甲型H1N1流感病毒分离株的基因特征，进一步了解新甲型H1N1流感病毒的分子生物学性状及与其他甲型流感病毒毒株的遗传进化距离，探讨我省新甲型H1N1流感病毒HA抗原性变异的分子基础。为流感病毒的变异变迁、疫苗的完善和药物敏感性研究打下基础。　　方法：　　1、临床标本检测及病毒分离:采用一步法荧光定量RT-PCR探针法和普通PCR或RT-PCR法对发热呼吸道感染患者的标本进行7种病毒的检测，将本实验室部分新甲型H1N1流感病毒检测阳性标本接种到犬肾细胞系(MDCK)进行病毒的分离培养。　　2、分子生物学实验:对分离毒病株采用流感病毒核酸检测试剂盒进行验证，并使用自己设计的新甲型H1N1流感毒HA和NA区特异性引物分别对毒株进行扩增;对于其他类型病毒核酸检测为阳性的标本，进行普通RT-PCR扩增，将PCR产物送杭州华大基因有限公司测序。　　3、生物信息学分析:参考甲型流感病毒各型别的代表株(特别是新甲型H1N1)以及中国大陆其他地区测定的甲型流感病毒序列，应用DNASTAR、DANMAN等生物学软件对浙江地区新甲型H1N1流感病毒HA的核苷酸及氨基酸序列进行系统的分析。　　结果：　　1、采用发热呼吸道病毒核酸检测试剂盒共检测发热呼吸道临床诊断病例3938例，采集样本4386份;浙江、江苏、福建三省均有病例，最多为2393例（浙江）;各月均有病例，最少为18例（2009年2月），最多为393例(2009年11月);病例男女性别比为1.50∶1;5岁以下病例占全部病例的20.75％;门急诊病例来源的病例占全部病例的76.70％。　　2、发热呼吸道症候群病原体总检出率为39.64％(942/3372);其中，病毒检出率为33.41％(847/2535);每年10月-3月是病毒检出率的高峰期，特别是人流感病毒;5岁以下病例病毒的检出率为31.99％，5岁及以上病例病毒的检出率为33.89％;　　3、发热呼吸道症候群各病毒检出率分别为:人流行性感冒病毒(20.28％)、呼吸道合胞病毒(6.19％)、人副流感病毒(4.81％)、人腺病毒(1.46％)、人偏肺病毒(1.22％)、人冠状病毒(1.38％)、人博卡病毒(1.15％)。　　4、我们共分离135株新甲型H1N1流感病毒分离株，并选择50株对HA片段分别进行基因序列测定，核苷酸序列进行同源性比对发现，彼此之间的同源性都较高，HA为:99.7-100.0％;与GenBank中的新甲型H1N1流感病毒参考株相比，HA同源性为:99.3-100.0％，且HA的变异性相对较小。　　结论:　　1、发热呼吸道患者的病源谱构成以人流行性感冒病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒为主。　　2、每年10月-3月是病毒检出率的高峰期，特别是人流感病毒;5岁以下与5岁及以上病例病毒的检出率并无明显区别;男女性别的检出率无显著差异。　　3、新甲型H1N1流感毒株基因分型及系统进化树分析表明，浙江地区与国内和国外分离株流行一致。核苷酸和氨基酸仅部分发生了轻微变异，但在重症新甲型H1N1患者中分离的一株病毒Hangzhou3-2009与浙江义乌的A/Zhejiang-Yiwu/11/2009(H1N1)的HA蛋白均发生D222G突变，该株变异与患者的病情可能有一定的关联。