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实验背景：既往的研究发现青藤碱通过抑制NF-κB炎症信号通路的活性有很好的治疗类风湿性关节炎的效果,而NF-κB信号通路在动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)发生发展过程中至关重要,泡沫细胞的出现是动脉粥样硬化形成的早期标志性炎症细胞。通过动物实验和体外实验发现青藤碱具有抗动脉粥样硬化炎症和胆固醇代谢紊乱的作用,但青藤碱减轻AS中泡沫细胞炎症反应机制不甚明了。本课题提出青藤碱可通过影响泡沫细胞内的NF-κB信号通路来治疗动脉粥样硬化类疾病的研究工作假说。实验目的：通过不同浓度的青藤碱(Sinomenine, SIN)体外作用THP-1单核巨噬细胞源性泡沫细胞,观察泡沫细胞的生物学活性变化及炎性介质包括核因子-κB (Nuclearfactor-KB, NF-κB),IL-1,IL-6及TNF-α的改变探索青藤碱抗动脉粥样硬化的可能抗炎机制,为青藤碱抗动脉粥样硬化的临床应用提供实验室依据。实验方法：PMA刺激THP-1单核细胞24h后,再给予ox-LDL刺激48h建立泡沫细胞模型。实验分为7个组：正常泡沫细胞组,5gg/mL辛伐他汀组,100μg/mL地塞米松组,青藤碱各浓度组(1μg/mL,20μg/mL,40μg/mL,80μg/mL)。各组分别给予不同含药培养基,于给药后24h测量药物对细胞的生长活性影响；于给药后12h,24h,48h收集细胞培养上清液及细胞,采用酶比色法测量细胞内胆固醇含量,ELISA方法测量NF-κB, IL-1, IL-6, TNF-a的含量,SPSS17.0分析数据结果。实验结果：1、THP-1单核细胞在受到24h PMA刺激及48h ox-LD L刺激后成为泡沫细胞；2、泡沫细胞内胆固醇含量增加,胆固醇酯的含量约占总胆固醇含量的一半；3、常规培养泡沫细胞,细胞存活率随时间的延长而降低,48h之后活细胞量急剧下降；4、青藤碱能够有效抑制THP-1单核细胞源性泡沫细胞的生长活性,在1μg/mL～100μg/mL范围内随着浓度的增加,青藤碱的抑制作用增强,呈明显的量-效关系：在对40μg/mL浓度青藤碱干预泡沫细胞的观察中发现随着时间的延长,细胞存活率下降,提示青藤碱对泡沫细胞的生长抑制作用存在一定的时-效关系；5、青藤碱干预后,泡沫细胞内的胆固醇酯含量下降,与不给药组有明显差异(P<0.01),但与地塞米松阳性组无明显差别；6、青藤碱能够抑制泡沫细胞内NF-κB的表达,以及NF-κB信号通路下游炎症分子IL-1, IL-6, TNF-a的分泌,且随着青藤碱浓度的增加,作用时间的延长,其抑制作用增强,存在一定的量-效关系和时-效关系。实验结论：1、THP-1单核细胞通过PMA刺激24h可称为巨噬细胞,再经ox-LDL刺激48h可成为泡沫细胞：2、青藤碱可能通过降低NF-κB的含量,以及NF-κB信号通路下游相关炎症细胞因子IL-1, IL-6, TNF-a的含量来抑制炎症反应,达到抗动脉粥样硬化炎症的作用：3、青藤碱可以通过抑制ox-LDL诱导的THP-1单核细胞源性泡沫细胞的生长活性,诱导泡沫细胞凋亡,与青藤碱抑制NF-κB的表达一样具有浓度依赖性,其机制可能与青藤碱抑制NF-κB信号通路的活性相关。4、青藤碱可以降低泡沫细胞内胆固醇酯的含量,缓解细胞内脂质代谢负荷,达到抗动脉粥样硬化的作用,且青藤碱各浓度组之间没有明显差别,提示青藤碱不具有直接的降脂作用,其调节胆固醇含量的机制可能与青藤碱抑制NF-κB信号通路的活性相关。