论文部分内容阅读
中医药是中华民族的瑰宝,保健类中药材在我国食品产业和现代医疗体系中占有重要位置。近年来,中药材中真菌及真菌毒素污染受到国内外广泛关注,对消费者健康及中药产业发展造成潜在威胁。本文基于DNA宏条形码技术对5种保健类药材表面真菌进行鉴定研究,分析真菌多样性,探究真菌污染影响因素。具体方法如下:采集药材表面真菌群落总DNA;扩增核糖体RNA内部转录间隔区2（ITS2）序列;基于Illumina MiSeq PE 300平台检测ITS2序列;序列经质量控制及拼接后,进行聚类分析;分析真菌群落多样性、物种组成及差异性等。研究的主要内容和结果如下:1、当归药材表面真菌鉴定研究。从我国5个当归主产地收集到15份样品,检测发现样品均被真菌污染。其中子囊菌门Ascomycota（14.89%～99.57%）、锤舌菌纲Leotiomycetes（0.19%～84.97%）、柔膜菌目Helotiales（0.19%～65.60%）及小双腔菌科Didymellaceae（0.26%～74.68%）为优势菌群。枝孢霉属Cladosporium、镰刀菌属Fusarium及青霉属Penicillium分布于所有样品。除ASRY3和ASRH1样品外,曲霉属Aspergillus和根霉属Rhizopus在其他所有样品中均有检出。此外,本研究共检到4种产毒真菌（草酸青霉Penicillium oxalicum、短密青霉P.brevicompactum、橘青霉P.citrinum 及棒曲霉Aspergillus clavatus）和 1 种人类致病菌（Sarocladium strictum）。2、西洋参药材表面真菌鉴定研究。从我国5个西洋参主产地采集的15份药材均检出真菌。毛霉门 Mucoromycota（13.53%～57.81%）、Mucoromycetes（13.86%～57.81%）、毛霉目 Mucorales（13.53%～57.81%）和根霉科Rhizopodaceae（13.86%～57.79%）为优势菌群。根霉属（13.86%～57.79%）、曲霉属（6.05%～35.59%）和镰刀菌属（2.62%～12.44%）为优势菌属。除PQBJ1和PQSX3样本外,青霉属分布于其他所有样品,其中PQSD2样本的相对丰度最高。研究共检出6种人类致病菌:热带假丝酵母Candida tropicalis、近平滑假丝酵母 C.parapsilosis、C.palmioleophila、涎沫念珠菌C.zeylanoides、马拉色菌Malassezia restricta 及 M.globose。3、何首乌药材表面真菌鉴定研究。从我国5个主要药材市场收集到18份何首乌样品,其中3份为制何首乌样品。分别根据收集地区及加工方式进行分组,发现样品组间真菌群落的组成存在显著差异。结果发现18份样品均检出真菌。子囊菌门（71.55%～99.77%）、散囊菌纲 Eurotiomycetes（6.30%～98.07%）、散囊菌目Eurotiales（2.57%～98.07%）、曲霉科 Aspergillaceae（3.77%～97.91%）及曲霉属（2.14%～94.05%）为优势菌群。共鉴定到6种产毒真菌（黄曲霉A.flavus、红绶曲霉 A.nomius、溜曲霉 A.tamarii、腐皮镰刀菌 Fusarium solani、覃青霉 P.paxillin及岐皱青霉P.steckii）和1种人类致病菌（C.tropicalis）。4、川贝母药材表面真菌鉴定研究。从5个主要药材市场采集15份川贝母样品,结果显示样品均被真菌污染。子囊菌门（41.58%～99.66%）、散囊菌纲（8.49%～63.93%）、散囊菌目（8.49%～63.53%）及曲霉科（8.49%～63.51%）为优势菌群。曲霉属（8.49%～63.41%）、根霉属（0%～57.42%）、镰刀菌属（0%～22.81%）为优势菌属。共鉴定到 5 种产毒真菌:P.brevicompactum、P.citrinum、P.oxalicum、粉红单端孢霉Trichothecium roseum及局限曲霉A.restrictus。5、金银花药材表面真菌鉴定研究。从5个金银花主产区采集了 18份样品,分别根据不同产地和加工方式进行分组,组间差异性分析显示样品组间真菌组成存在显著差异。18份金银花样品均被真菌污染,子囊菌门（20.77%～88.41%）、Mucoromycetes（6.40%～79.23%）、毛霉目（6.40%～79.23%）及根霉科（6.40%～79.23%）为优势菌群。所有样品均被根霉属和曲霉属污染。除LJFHB3样品外,镰刀菌属也几乎遍布所有样品。此外,检出10种人类致病菌:C.tropicalis、C.parapsilosis、清酒假丝酵母 C.sake、M.restricta、合轴马拉色菌 M.sympodialis、海洋酵母Kodamaea ohmeri、长孢洛德酵母Lodderomyces elongisporus、裂褶菌Sc hiz ophyllum commune、Wallemia sebi及卷枝毛霉Mucor circinelloides。本研究可为监测保健类药材的真菌污染提供参考,进而为后期可能发生的真菌毒素污染问题提供早期预警,对中药材标准化生产及公众安全用药具有重要意义。