基于血栓素探讨类风湿关节炎血瘀病机的分子机制研究

来源 :广州中医药大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:yanyuhan66
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目的:通过文献研究了解中医临床治疗痹证的用药特点以及活血化瘀药的运用情况;从临床研究出发,探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)疾病活动度与患者血清TxA2表达水平的相关性;最后利用分子生物学方法初步揭示血栓素在类风湿关节炎的发病机制中的相关通路。本课题将基于血栓素深入探讨血瘀病机,寻找治疗RA的新靶点和新方向,并促进中医药的发展和推广。方法:1.文献研究主要采用频数分析方法。本课题先对纳入医案的处方用药进行规范化处理,然后运用EM平台的频数分析模块分析处理数据。2.临床研究的研究方法包括信息采集以及ELISA。通过信息采集汇总RA患者的基本信息、与DAS28评分相关信息以及用药信息等;使用ELISA方法检测RA患者以及健康体检人群血样标本中TxB2的表达。并对DAS28与TxB2进行相关性检验。3.基础研究的研究方法包括细胞培养、MTS.PCR.Western Blot等实验方法。结果:1.文献研究:研究共纳入161个符合条件的医案,共涉及196味中药,总使用频数为2099次,平均每个处方含13.04味药。频数分析结果证明近现代医家临床常用祛风湿药、补虚药以及活血化瘀药治疗痹证。同时活血化瘀药运用广泛,在161个处方中,高达156个处方使用到活血化瘀药,占96.91%。2.临床研究:非DMARDs组与DMARDs组的活动期RA患者DAS28评分无统计学差异。DMARDs组和DMARDs组平均血清TxB2表达量分别为971.8±399.5pg/mi和824.3±275.1pg/ml。组间差异也无统计学意义。而健康对照组TxB2表达量仅为369.1±127.1pg/ml,明显低于两组RA患者血清TxB2水平(均为p<0.05)。DAS28评分与血清TxB2表达量的Pearson和Spearman相关性分析结果提示在非DMARDs组和DMARDs组DAS28评分与血清TxB2表达量具有明显相关性(p<0.001,r=0.891和p<0.001,r=0.953),但炎症指标CRP和ESR均与TxB2无明显相关性。3.基础研究:随着作用时间延长和药物浓度的增加,BM567对RA滑膜细胞MH7A增殖的抑制效应逐渐增强;BM567可明显抑制细胞骨架成分ACTN-1的表达。BM567可同时抑制COX-2蛋白和mRNA的表达,而且对核转录调控因子NF-kappa B2的活化也有明显抑制作用。结论:1.近现代医家临床治疗痹证时善用祛风湿药、补虚药以及活血化瘀药。其中活血化瘀药在痹证的治疗中运用特别广泛,有96.8%的处方含有活血化瘀药,提示活血化瘀药具有广泛的临床运用基础,佐证本课题组“血瘀贯穿痹病的始末”的病因病机认识。2.RA患者血清TxB2表达量与疾病活动度评价指标DAS28具有很好的相关性,提示TxB2可作为评价RA疾病活动度的新指标;而非DMARDs组和DMARDs组间TxB2表达无差异则提示TxA2相关通路是DMARDs药物的作用盲点,对该通路的深入研究将有利于寻找治疗RA的新靶点。3.在RA滑膜细胞中存在TxA2自我激活反馈通路。该通路可通过激活核因子NF-kB2而发挥调控多种细胞因子的表达,进而参与整个滑膜炎的病理改变;同时该通路还可促进ACTN-1的表达,进而导致细胞异常增殖。而ACTN-1也可通过活化外周的血小板而发挥细胞外调控作用,进一步激活TxA2通路,加剧滑膜炎。总而言之,RA血瘀病机的关键分子基础之一是以血栓素为效应分子,参与类风湿关节炎整个滑膜炎的病理改变。
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