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目的:探讨异丙酚对细菌脂多糖(LPS)刺激之后的脐静脉内皮细胞(HUVECs,下文简称EC)的细胞间粘附分子一1(ICAM一1)表达和核转录因子KB活性的影响,以期从基因转录的调控水平来探求异丙酚可能的抗炎机制。
方法:选择复苏后的3～4代HUVECs进行转板,随机分为六组;(1)对照组两组:A<,1>组加入LPS(1ug/ml)刺激2h,A<,2>组加入LPS(1ug/ml)刺激8h:(2)实验组四组:B。组和B。组先都加入12S(1ug/m1)再加入异丙酚25umol/l后,分别培养2h和8h;C<,1>组和C<,2>组先都加入LPS(1ug/ml)再加入异丙酚50llmol/l后,分别培养2h和8h。然后提取细胞的RNA以RT-PCR测定各组细胞的ICAM一1的mRNA的表达,提取血液中的多形核中性粒细胞(PMN),测PMN与EC的粘附率,以免疫细胞化学测定NF-κ BP<,65>亚基的核阳性表达细胞百分率。
结果:
①PMN与HUVECs粘附率计数:不同时点对照组A<,1>与A<,2>、实验组B<,1>与B<,2>、C<,1>与C<,2>之间的PMN-EC粘附率,有显著统计学差异(P<0.05)。在LPS刺激2h时点,A<,1>组、B<,1>组、C<,1>组的PMN-EC粘附率差异无统计学意义(P>0.05);而LPS刺激8h,B<,2>组、C<,2>组的PMN-EC粘附率分别与对照组A<,2>比较都显著降低(P<0.05)。
②HUVECs的ICAM一1mRNA的表达量:对照组A<,1>与A<,2>、实验组B<,1>与B<,2>、C<,1>与C<,2>之间的ICAM一1mRNA表达量，发现具有显著统计学差异(P<0.05)。在LPS刺激2h的A<,1>组、B<,1>组、C<,1>组之间的ICAM-1mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。而LPS刺激8h后，B<,2>组、C<,2>组的ICAM-1mRNA分别与对照组A<,2>比较都显著减少(P<0.05)。
③细胞免疫化学测NF-K BP<,65>的核阳性表达：在未加LPS刺激的正常对照片上NF-KBP<,65>核阳性表达细胞几乎看不到，LPS刺激2h后的对照组A<,1>的核阳性细胞率为80.28±6.24％，A<,1>与A<,2>组相比较，二者并无统计学差异(P>0.05)。B<,1>组与B<,2>组、C<,1>组与C<,2>组之间也无统计学差异(P>0.05)。LPS刺激2h的B<,1>组、C<,1>组的核阳性细胞率比对照组A<,1>显著降低(P<0.05)；LPS刺激8h后的B<,2>组、C<,2>组的核阳性细胞率比对照组A<,2>也有显著降低(P<0.05)。并且B<,1>组与C<,1>组、B<,1>组与C<,2>组之间都有统计学差异(P<0.05)。
结论：1．PMN与HUVECs粘附率随工CAM-1的表达增加而增加，ICAM-1的表达随NF—kB的激活程度增加而增加。
2．异丙酚能有效抑制LPS刺激HUVECs后NF-KB活性的增加，从而抑制ICAM—l的大量表达，抑制PMN与HUVECs的粘附，减轻机体的炎症反应。