论文部分内容阅读
近年来,世界范围内人口的迅速老龄化,使得多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)的发病率明显升高,位居血液肿瘤第2位,仅次于非何杰金淋巴瘤。尽管免疫调节剂与蛋白酶体抑制剂为代表的药物极大地改善了MM预后,但是几乎所有的MM患者最终出现疾病难治与复发,至今仍属不可治愈性疾病。所以寻找低毒有效的药物来更有效的治疗多发性骨髓瘤成为研究者的重点。现在广泛用于治疗多发性骨髓瘤的核心药物硼替佐米(Bortezomib,BTZ)由于持续应用出现了耐药性,所以需要更好的药物辅助来增强它的作用。研究表明甲基硒酸(methylseleninic acid,MSA)作为一种有机硒化合物,具有广泛的抗癌效应。MSA可以无需体内代谢酶转化而直接作用于靶细胞,同时它作为膳食营养硒代谢的中间产物,其辅助治疗肿瘤的效果已得到证实,所以MSA有望成为一种有应用前景的辅助药物。本研究旨在探讨MSA协同BTZ对MM细胞凋亡的影响及信号机制,还观察了内质网硒蛋白在MM细胞中的表达水平及在BTZ诱导的细胞凋亡中的可能作用,为多发性骨髓瘤的治疗及进一步研究提供理论与实验依据。主要实验发现如下:1、MSA协同BTZ诱导的MM细胞凋亡作用及信号机制。首先,我们选择U266,RPMI-8226,OPM-2这三种特定MM细胞系作为研究对象。利用MTT实验检测不同浓度梯度的MSA和BTZ单药或者两者联合作用对MM细胞抗增殖的作用,发现MSA增强了BTZ对三种MM细胞增殖的抑制作用。其次,我们通过AnnexinⅤ以及PI双染色,用流式细胞仪检测了IC50浓度时MSA与BTZ单药或者联合作用诱导MM细胞凋亡以及对细胞周期阻滞的影响,发现MSA能够显著增强BTZ诱导MM细胞的凋亡并且引发G2/M期阻滞。紧接着通过western blot实验发现,MSA与BTZ联合作用明显下调抑凋亡Bcl-2信号水平,并显著上调促凋亡Bax水平,又有实验表明Bcl-2家族参与了内质网应激诱导的细胞凋亡,表明其诱导凋亡的途径可能经过内质网应激这种凋亡信号通路。鉴于BTZ是一种蛋白酶体抑制剂,MM细胞具有产生大量非功能β2-微球蛋白的特征,推测未折叠蛋白响应(unfolding protein response,UPR)介导的内质网应激(ER stress)在其中可能起重要作用。为了探讨ER stress在MSA促进BTZ诱导MM细胞凋亡的作用机制,我们通过Western Blot检测了UPR和内质网应激中的几种标志性蛋白表达水平,发现MSA与BTZ联合作用明显激活了内质网应激信号。同时利用XBP-1酶切实验进一步验证了这个结果。表明MSA可能主要通过ER Stress这条途径增强BTZ诱导多发性骨髓瘤细胞的凋亡。2、内质网硒蛋白组在MM细胞中对BTZ的响应。首先,我们利用荧光定量PCR方法检测了内质网上的7种硒蛋白基因在三种多发性骨髓瘤细胞的mRNA表达水平,根据结果,我们把目标锁定在SelS,在基因跟蛋白水平分别检测其表达水平,进一步分析其在介导多发性骨髓瘤细胞凋亡中的作用。在本文中我们首次将有机硒化合物应用于多发性骨髓瘤,并且发现其有极大的可能成为多发性骨髓瘤治疗的一种辅助药物,不仅丰富了多发性骨髓瘤的治疗方案,而且还进一步推进了硒化合物的研究。其次,我们为内质网硒蛋白在多发性骨髓瘤中的研究提供了一个很好的开端。