目的比较三种不同种类的胚胎干细胞(embryonic stem cells ESC)即C57BL/ 6J-ESC、S8-ESC和人-ESC对博莱霉素所致C57BL/6J小鼠肺损伤的治疗作用。选择出治疗作用最佳的细胞,并研究多次注射该细胞对肺损伤的治疗作用,为以后的研究提供参考。方法一、探索适合本研究的博莱霉素剂量1、动物分组:C57BL/6J雌性小鼠40只,根据气管内注射博莱霉素剂量分别命为实验组1、2、3组,每组各12只;对照组4只,共四组;2、动物模型制作:实验1、2、3组分别经气管注入6 mg/kg、8 mg/kg、10mg/kg博莱霉素,对照组气管内注入生理盐水;3、观察指标:小鼠存活情况、体重变化以及肺组织的病理改变。二、单次经尾静脉移植胚胎干细胞对博莱霉素诱导的小鼠肺组织损伤的治疗作用探索1、动物分组:C57BL/6J雌性小鼠50只,随机分为五组,分别为:空白对照组、模型组、模型+C57BL/6J胚胎干细胞组、模型+S8—胚胎干细胞组、模型+人胚胎干细胞组,每组10只;2、动物模型制作及胚胎干细胞移植:除空白对照组外,其余四组均经气管给予博莱霉素制做肺损伤模型,三组干细胞给予组小鼠在造模后一小时,分别经尾静脉移植1.0×106/ml的C57BL/6J胚胎干细胞, S8胚胎干细胞和人胚胎干细胞,模型组给予相同体积的生理盐水。3、观察指标:小鼠生存时间、肺组织病理变化、肺组织羟脯氨酸含量的测定和干细胞肺内定植情况检测。三、两次经尾静脉移植胚胎干细胞对博莱霉素诱导的小鼠肺损伤的治疗作用探索1、动物分组:C57BL/6J雌性小鼠30只,随机分成3组,每组10只,分别为:博莱霉素模型组(简称:模型组)和实验1组(单次移植S8ESC)以及试验2组(两次移植S8ESC);2、动物模型制作及胚胎干细胞移植:S8ESC移植组小鼠在造模后一小时,分别经尾静脉移植1.0×106/ml的S8ESC,模型组给予相同体积的生理盐水,试验2组在造模后第三天再次注入S8ESC,模型组以及试验1组给予相同体积的生理盐水;3、观察指标:小鼠生存时间、肺组织病理变化、肺组织羟脯氨酸含量的测定。结果一、博莱霉素剂量的探索结果:小鼠气管内滴注博莱霉素,可以造成C57BL/6小鼠的间质增生和肺组织实变,这种病变给药1周即可出现,2周后加重,并且各实验组相继有小鼠发生死亡,大部分于试验后7-12天死亡,其中实验3组未及实验终点(14天)即全部死亡;8 mg/kg组比6 mg/kg组病变明显。两种剂量可酌情选用,本课题以观察胚胎干细胞对博莱霉素所致小鼠肺损伤的治疗效果为主要目的,故选8mg/kg为宜。二、单次经尾静脉移植胚胎干细胞对博莱霉素诱导的小鼠肺组织损伤的治疗作用探索:1、死亡率比较:三组胚胎干细胞(ESC)给予组小鼠第八天死亡率较模型组明显降低,(模型组为50%,C57BL/6J-ESC组为37.5%,S8-ESC组为20%,人-ESC组为20%);2、病理变化:S8-ESC移植组,肺组织病理变化明显轻于模型组,其他干细胞移植组与模型组相似。3、肺组织羟脯氨酸含量:S8-ESC移植组明显低于模型组(P=0.0098,<0.01),人-ESC组与模型组比较,P=0.0402,<0.05, > 0.01,);C57BL/6J-ESC组与模型组比较差别不明显(P=0.0627,>0.05)。4、三种胚胎干细胞移植后分别于1、3、12、和24小时取材,均可检测到其在肺内停留的信号,但以3小时取材组信号最强。3天后肺内所有干细胞信号消失。三、两次经尾静脉移植胚胎干细胞对博莱霉素诱导的小鼠肺损伤的治疗作用探索:1、死亡率比较:试验2组14天及28天的死亡率均低于对照组以及试验1组(试验2组分别为70%、90%,对照组和试验1组分别为100%、100%,试验2组28天死亡率t检验P=0.027,<0.05,试验1组与对照组无明显差异);2、病理变化:移植组肺组织病理变化明显轻于模型组,而试验2组的病理损害比试验1组轻;3、肺组织羟脯氨酸含量:移植2组明显低于模型组以及移植1组(P值分别为0.004,<0.01和0.048,<0.05)结论移植S8胚胎干细胞可以有效的提高C57BL/6J小鼠肺组织对博莱霉素的耐受性,减轻肺组织的急性期损伤。