第一部分宫内发育迟缓对大鼠血压及肾功能的影响背景近年来，大量流行病学资料显示，宫内发育迟缓（IUGR）与成年期疾病如高血压、2型糖尿病、冠心病以及慢性肾病等密切相关，提示宫内环境，甚至生后早期环境，可能通过“发育程序化”途径，增加子代发生某些成年期疾病的危险性。但是目前具体的机制尚未阐明。我们选用孕期全程低蛋白饮食法建立IUGR大鼠模型，动态观察IUGR对大鼠血压以及肾脏结构和功能的影响，探讨宫内环境对成年期高血压和肾脏疾病的作用。方法雌性SD大鼠，孕期全程低蛋白（6％蛋白）营养，建立IUGR大鼠模型，并且设立正常对照。选取IUGR雄鼠作为研究对象。选择4周、8周、12周龄作为动态观察节点，通过尾动脉测量仪测定大鼠血压；常规生化方法测定24小时尿蛋白定量。12周龄时利用酸消化方法计数肾小球数目；对氨基马脲酸清除率法观察有效肾血浆流量（RPF）；菊粉清除率观察肾小球滤过率（GFR）。结果IUGR模型组新生鼠出生体重明显低于正常新生鼠（6.92±0.33g vs．4.81±0.27g，P＜0.001）。与正常对照组相比，IUGR大鼠单侧肾脏肾小球数目下降了约21％（22900±926个vs．28861±1044个，P＜0.01）；在8周龄时出现高血压（125.2±2.3mmHg vs．109.4±3.1mmHg，P＜0.01），并且血压的增高至12周时更为明显（132.1±2.9mmHg vs．115.2±2.3mmHg，P＜0.01）；12周龄时出现了肾重／体重的增加（0.378±0.019％vs．0.334±0.007％，P＜0.05）和轻度的蛋白尿(118.46±21.85 mg·kg^-1·d^-1vs．69.72±10.35 mg·kg^-1·d^-1，P＜0.05)，而GFR和RPF没有明显差异（P均＞0.05）。结论我们的实验结果提示，在大鼠孕期低蛋白营养所致的IUGR可以引起高血压的发生，并且肾单位数目的减少可能是程序化高血压的机制之一。第二部分宫内发育迟缓引起肾单位数目减少的机制研究背景人类研究及多项动物实验均证实宫内发育迟缓（IUGR）与肾单位数目减少明显相关，但是目前机制未明。肾脏发育包含快速的结构重建，尤其在后肾阶段。这个过程需要大量的细胞增殖和凋亡，并且受到多种相关基因的严格调控，如Wilms瘤1基因（WT1）、Bcl-2、Bax和p53等。因此，本研究拟于观察IUGR是否通过影响肾发生中细胞增殖和凋亡及其关键因子的表达，引起肾单位数目减少的发生。方法采用孕期全程低蛋白（6％蛋白）营养建立IUGR大鼠模型。选取IUGR新生雄鼠作为研究对象，采用Ki-67免疫染色和TUNEL法检测肾组织细胞的增殖和凋亡；实时定量PCR测定肾组织WT1、Bcl-2、Bax及p53的mRNA表达水平；Western blot方法检测肾组织中WT1和Bcl-2蛋白质表达。2周龄（肾发生完成）时测定肾单位数目。结果2周龄时，IGUR大鼠肾单位数目明显少于对照组（22891±1242个vs．28466±919个，P＜0.001）。与对照组相比，IUGR新生鼠肾脏皮质区明显较薄（391.94±24.73μm vs．425.50±24.01μm，P＜0.01），生肾区占总皮质区厚度的百分比明显增高（38.1±3.4％vs．24.3±6.7％，P＜0.01）；生肾区TUNEL阳性细胞数明显增多（21.26±1.94％vs．12.14±1.96％，P＜0.001）；肾脏WT1、Bel-2 mRNA表达减少（4.96+0.17 vs．5.33+0.22，4.28+0.14 vs．4.46+0.11，P均＜0.01），Bel-2mRNA／Bax mRNA的比例降低（0.739±0.022 vs．0.770±0.030，P＜0.05），而p53mRNA的表达没有差异（P＞0.05）；肾组织中WTl和Bel-2蛋白质的表达量也明显减少（0.364±0.015 vs 0.554±0.053，0.573±0.022 vs．0.914±0.059，P均＜0.001）。结论IUGR大鼠肾单位数目减少可能与肾发生中细胞凋亡增加相关，而WT1、Bel-2表达减少，Bel-2／Bax比例降低可能是细胞凋亡增加的分子机制之一。第三部分生后高蛋白营养干预对宫内发育迟缓大鼠肾脏的影响背景既往认为，对宫内发育迟缓（IUGR）儿生后给予高蛋白饮食，将有助于体格的快速增长。但是近来，有人提出“预计的适应性改变”（predictive adaptive response，PAR）理论，认为产前环境与产后环境的不匹配，可以增加继发成年期疾病的危险性。并且，高蛋白本身可以引起肾小球高灌注、高滤过，引起肾脏损伤的进一步加重。因此，本部分实验我们设计产前、产后差异环境，观察高蛋白营养对IUGR大鼠肾脏发育及肾功能的影响。方法采用孕期全程低蛋白（6％蛋白）营养建立IUGR大鼠模型。选取IUGR新生雄鼠作为研究对象，生后分别给予常规饲料（22％蛋白）（IUGR组）和高蛋白饲料（30％）（HP组）喂养，同时设立正常对照（Con组）。选择4周、8周、12周龄作为动态观察节点，通过尾动脉测量仪测定大鼠血压；常规生化方法测定24小时尿蛋白定量。12周龄时利用酸消化方法计数肾小球数目；光镜和电镜观察肾组织形态；实时定量PCR测定肾皮质desmin mRNA表达水平。结果12周龄时，与IUGR组相比，HP组大鼠肾小球数目未见增加（23043±595个／单侧肾脏vs．22900±926个／单侧肾脏，P＞0.05），但是高血压和蛋白尿的程度均明显增加(138.6±2.8mmHg vs．132.1±2.9mmHg，P＜0.01；202.61±62.55mg·kg^-1·d^-1 vs．118.46±21.85，P＜0.001)。PAS染色显示HP组大鼠肾小球细胞外基质较Con组明显增多（31.6±2.3％vs．21.3±2.1％，P＜0.01）。电镜显示，IUGR组大鼠仅见少量足细胞足突融合；而HP组大鼠呈现明显的系膜细胞增生，足突部分融合。IUGR和HP组大鼠肾皮质desmin mRNA表达量均明显高于Con组（IUGR组：3.33±0.41，HP组：4.06±0.27 vs．Con组：2.77±0.37，P均＜0.05）：且HP组的表达增加较IUGR组更为明显（P＜0.05）。结论IUGR大鼠生后给予高蛋白饮食干预，不仅不能纠正肾单位数目的减少，而且加重了高血压和蛋白尿的严重程度。足细胞损伤可能是IUGR和生后高蛋白饮食引起蛋白尿的机制之一。