弥漫性大B细胞淋巴瘤患者外周血中B细胞表型及活化功能研究

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背景弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是成人恶性淋巴瘤中最常见的一种类型,由B细胞的克隆性增殖导致,B细胞表型及功能改变在DLBCL的发病机制中具有重要作用。肿瘤分期和病毒感染对于DLBCL患者治疗方式的确定和预后的评估具有重要意义。利妥昔单抗加上环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松(即R-CHOP治疗方案)的应用使DLBCL患者的生存率明显提高,但这一疗法可能影响患者的免疫状态。有研究发现DLBCL患者外周血中B细胞数量明显增加,但各种B细胞亚群,特别是近年新发现的B细胞亚群,在不同状态DLBCL患者中的变化尚未完全阐明。在B细胞恶性肿瘤中,B细胞功能亦可发生改变,其表现之一为B细胞受体(B cell receptor,BCR)信号传导能力的变化,在DLBCL患者中不同B细胞亚群活化能力的改变尚未完全阐明。本研究旨在对DLBCL患者外周血B细胞组成进行详细分析,分别比较疾病分期或合并病毒感染对DLBCL患者外周血B细胞亚群组成的影响,并分析R-CHOP疗法导致的B细胞组成变化。同时,我们通过检测BCR早期信号传导,研究DLBCL患者体内B细胞活化能力。方法收集DLBCL患者和健康对照的静脉抗凝血样本,整理患者临床信息。明确患者肿瘤分期、病毒感染情况,以及治疗方法和所处治疗阶段。分离人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),使用多色流式细胞术对B细胞表型进行分析。使用Ionomycin、anti-Ig M或anti-Ig M+anti-CD40刺激患者和健康对照的外周血B细胞,检测钙离子动员,以反映BCR信号通路的活化情况。结果虽然DLBCL患者外周血中总B细胞数量与健康对照无明显差异,但是B细胞组成发生了改变。患者未类别转换记忆B细胞数量降低,类别转换记忆B细胞数量升高,浆母细胞数量升高。有趣的是,近年来新发现的非典型B细胞的数量在患者外周血中也有所上升。肿瘤分期不同的DLBCL患者外周血中各B细胞亚群存在一定差异。合并乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的DLBCL患者过渡B细胞数量低于未感染HBV的患者。R-CHOP疗法能够导致患者外周血B细胞数量发生改变。对BCR活化功能的研究表明,患者初始B细胞内质网储存钙的释放高于健康对照。结论在表型上,DLBCL患者外周血B细胞亚群与健康人不同;分期不同的DLBCL患者外周血B细胞亚群存在一定差异;合并HBV感染的DLBCL患者外周血部分B细胞亚群也发生了改变;R-CHOP疗法能够影响患者外周血B细胞组成。外周血B细胞表型对于DLBCL患者治疗方式的选择和预后的判断可能具有参考价值,对患者免疫状态的评估可能具有提示作用。在功能上,DLBCL患者外周血B细胞亚群的BCR信号通路的活化存在异常,这对于理解BCR信号传导在DLBCL发病机制中的作用具有重要意义。
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