目的：　　胰腺癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，更是目前预后最差的实体性肿瘤。虽然近年来肿瘤的诊疗技术有了很大进步，然而胰腺癌总的预后仍然没有很大改观。这归因于许多因素，包括胰腺癌对常规化疗治疗方法的耐药。吉西他滨是治疗胰腺癌的标准一线药物，但由于胰腺癌的化疗耐药性，其只对低于20％的患者有较好的治疗效果。因此逆转胰腺癌耐药特性也许会显著改善对胰腺癌的治疗效果。近年来，Nrf2信号通路逐渐被认识到在胰腺癌对吉西他滨化疗耐药中扮演着重要的角色，但是目前临床上仍然缺少针对于Nrf2信号通路的靶向药物。鸦胆子苦醇，一种苦木内酯类化合物，在多种肿瘤中被证实可以通过抑制Nrf2通路减少肿瘤的化疗耐药性。另外，我们在前期研究中已经发现鸦胆子苦醇可以抑制胰腺癌细胞生长并诱导凋亡，但其对胰腺癌中Nrf2信号通路的作用及胰腺癌耐药特性的影响目前还不清楚。本文旨在探讨鸦胆子苦醇对吉西他滨治疗胰腺癌的影响及可能存在的机制。　　方法：　　实验分为四部分：　　（1）针对吉西他滨对胰腺癌细胞Nrf2信号通路的影响的研究。实验分组为对照组和吉西他滨（5μ mol/L）处理组。分别用蛋白质免疫印迹和实时荧光定量PCR对胰腺癌细胞中Nrf2及其靶基因NQO1和HO-1的蛋白表达量和mRNA进行定量检测。　　（2）针对鸦胆子苦醇对胰腺癌细胞Nrf2信号通路及ROS 水平的影响的研究。首先用蛋白质免疫印迹研究 PATU-8988 胰腺癌细胞经0.5μ mol/L的鸦胆子苦醇处理一定时间（0、1、2、4、8、16和24小时）后Nrf2蛋白的表达水平。再用其研究胰腺癌细胞经0.1、0.5和1.0μ mol/L的鸦胆子苦醇处理8小时后Nrf2及其靶基因NQO1、HO-1、MDR1和MRP5的蛋白表达水平。之后用实时荧光定量PCR研究0.5μ mol/L鸦胆子苦醇对胰腺癌细胞内Nrf2靶基因NQO1、HO-1、MRP1、MRP2、MRP3、MRP4和MRP5的mRNA水平的作用。然后用活性氧测定试剂盒研究0.5μ mol/L鸦胆子苦醇对胰腺癌细胞内ROS水平的影响。　　（3）针对鸦胆子苦醇对吉西他滨治疗胰腺癌的影响的体外研究。实验分组为对照组、鸦胆子苦醇处理、吉西他滨处理组和鸦胆子苦醇和吉西他滨联合处理组。分别用蛋白质免疫印迹、实时荧光定量PCR和细胞荧光试验对Nrf2的蛋白表达水平、mRNA 水平和细胞核内蛋白表达水平进行定量检测。分别用 CCK-8 试验、细胞集落形成实验和Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞活性、细胞增殖能力和细胞凋亡水平。　　（4）针对胆子苦醇对吉西他滨治疗胰腺癌的影响的体内研究。首先将PANC-1细胞注射到裸鼠右侧的皮下组织。一周后，我们随机将小鼠分成对照组、鸦胆子苦醇处理组、吉西他滨处理组和鸦胆子苦醇和吉西他滨联合处理组。分别检测肿瘤体积。裸鼠处死后分别检测肿瘤质量，并用免疫组织化学染色评估对照组和鸦胆子苦醇处理组异种移植肿瘤组织中Nrf2、NQO1、Ki67和active Caspase-3的表达水平。　　结果：　　（1）胰腺癌细胞经5μ mol/L吉西他滨作用48小时后，细胞内Nrf2，NQO1和HO-1的蛋白表达水平和mRNA水平增加。　　（2）胰腺癌细胞PATU-8988经终浓度为0.5μ mol/L的鸦胆子苦醇处理1小时后Nrf2蛋白表达水平便出现了下降，鸦胆子苦醇对Nrf2的抑制效果可持续24小时。0.1、0.5和1.0μ mol/L的鸦胆子苦醇分别作用胰腺癌细胞8小时后细胞内的Nrf2及其靶基因NQO1、HO-1、MDR1和 MRP5 的蛋白表达水平降低，但 Keap1 的蛋白表达量无明显变化。此外， 0.5μ mol/L鸦胆子苦醇处理胰腺癌细胞8小时可降低细胞内的NQO1、HO-1、MRP1、MRP2、MRP3、MRP4和MRP5的mRNA水平。同时，0.5μ mol/L鸦胆子苦醇处理胰腺癌细胞24小时后可显著增加细胞内ROS水平。　　（3）鸦胆子苦醇可以逆转吉西他滨引起的细胞内Nrf2蛋白表达水平上调。但鸦胆子苦醇并未降低Nrf2的mRNA水平，也未逆转吉西他滨引起的Nrf2 mRNA水平的增加。鸦胆子苦醇和吉西他滨联合处理组相对于其他组能更显著地降低胰腺癌细胞活性、抑制胰腺癌细胞增殖及诱导胰腺细胞凋亡。　　（4）鸦胆子苦醇和吉西他滨联合处理组相对于其他组能更显著地降低裸鼠皮下异体移植胰腺癌组织的体积及重量。和对照相比，鸦胆子苦醇处理组的异种移植肿瘤组织中Nrf2和NQO1水平较低且Ki67阳性细胞比例较低，但active Caspase-3阳性的细胞比例增加。　　结论：　　1、吉西他滨可诱导胰腺癌细胞内的Nrf2激活。　　2、鸦胆子苦醇抑制胰腺癌细胞内的Nrf2信号通路并增加细胞内ROS水平。　　3、鸦胆子苦醇逆转吉西他滨诱导的Nrf2激活。　　4、鸦胆子苦醇增强吉西他滨对胰腺癌细胞的抑癌作用。　　5、鸦胆子苦醇增强了吉西他滨对PANC-1异种移植物的抗肿瘤作用。