青贮用优良乳酸菌的筛选及苹果渣发酵试验研究

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本研究采用溶钙圈法分离青贮用功能乳酸菌,通过触酶试验,发酵葡萄糖产酸产气特征、生长曲线和产酸速率等指标筛选优良菌株,并进一步探讨筛得乳酸菌的生长规律和产酸特性。通过4株乳酸菌的单菌和混菌青贮,分析不同微生物配比试验苹果渣青贮饲料的乳酸菌数、有机酸含量及各类养分指标的变化,最终获得青贮最佳菌株配伍,为调制新型苹果渣青贮饲料提供一定理论参考。其主要研究结果如下:(1)筛选获得4株繁殖快、产酸能力强的乳酸菌,分别编号为R7、R3、Re、Rg。经传统的形态学、生理生化指标及16S rDNA序列分析,最终确定4株菌的分类地位:R7为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum);R3为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus);Rg为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum); Re为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)。(2)生物学特性研究表明:4株菌均可在15-50℃范围内生长。菌株R7繁殖最快,降酸能力最强,发酵液乳酸含量最高,占总酸含量的95.40%,在pH值3.0条件下可以旺盛繁殖,同时可耐受质量浓度0.08g/mL NaCl;R3、Re生长及产酸仅次于R7,酸碱耐受性较强;Rg在50℃生长良好,可耐受高温。(3)最优菌株配伍筛选试验结果显示:以苹果渣为单一青贮原料,人工添加乳酸菌,采用实验室小型罐式发酵,青贮后果渣感官品质优良;乳酸菌的添加能明显提高发酵果渣饲料中乳酸含量,降低丁酸的生成量,使饲料pH值迅速下降,养分损失减少;适用于苹果渣青贮的最优菌株配伍组合为R7+R3,即植物乳杆菌与戊糖乳杆菌混合青贮:处理组R7+R3乳酸菌数在菌剂接入2d即可达到最高值9.05×108CFU/g FM,且在青贮结束时有效活菌数仍能保持在1×107CFU/g FM;处理组R7+R3乳酸含量及乳酸与乙酸比值明显高于其它处理组,且在45d基质总酸含量达到最大值5.59g/kg;处理组R7+R3青贮45d时氨态氮与总氮比值最低,为13.02%;处理组R7+R3干物质和粗蛋白的含量明显高于其它组,分别为294.3g/kg和9.28%;处理组R7+R3可溶性碳水化合物保存率最高,可达到91.37%。(4)复合微生物添加剂小试结果表明:在优势乳酸菌组合中同时添加等量的酵母菌和芽孢杆菌可取得良好的青贮效果,乳酸菌和酵母菌均能旺盛繁殖,发酵基质pH值迅速下降,氨态氮与总氮比值明显降低;芽孢杆菌能保持105CFU/g FM,于后期动物饲喂过程中起调节肠道菌群的作用。
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