恶性肿瘤已成为当前影响人类健康的头号杀手。虽然手术、放化疗等治疗方法已经显著提高了肿瘤患者的生存率,但仍存在副作用大,对中晚期、远端转移或放化疗不敏感的肿瘤患者疗效差等不足,因此有必要探寻新的更有效的肿瘤治疗手段。近年来,溶瘤病毒因其具有杀伤效率高、特异性好、安全性高、副作用小等特点,已逐渐成为极具潜力的恶性肿瘤治疗手段。新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是一种对禽类高致病、高致死性的单股负链RNA病毒,属副黏病毒科、副黏病毒亚科中的禽副黏病毒属。自20世纪50年代首次发现NDV能够抑制晚期胃癌转移以来,许多研究已经证实NDV具有特异性杀伤肿瘤细胞的潜力,同时还能刺激免疫系统,提高机体自身的抗肿瘤能力。在美国,NDV已经被美国国家癌症研究所(NCI)列为抗肿瘤的补充和替代疗法(CAM)。国外关于NDV的溶瘤研究主要集中在73-T、MTH-68、HUJ、PV701等已经过Ⅰ、Ⅱ期临床实验的毒株;国内对于NDV的溶瘤研究则主要以NDV弱毒株La Sota为主,而较少有对中国分离的NDV强毒株F48E9的抗肿瘤谱和抗肿瘤效果的研究。为此,本研究以NDVF48E9株为对象,初步评价了其对多种肿瘤细胞的体外杀伤效果、对鼻咽癌(CNE1)、肝癌(HepG2)、乳腺癌(MCF7)等细胞裸鼠皮下移植瘤的体内抑制作用,并对其安全性进行初步的评估。同时,为了提高NDV的病毒滴定效率,本研究制备了 F48E9株核蛋白(NP)的单克隆抗体(单抗),并建立了一个基于NP单抗的双抗体夹心ELISA,使其成为一个有效的NDV病毒滴定方法,较传统的TCID50测定或空斑形成法更加简便省时。本论文的主要研究结果如下:(1)本研究建立了 Vero细胞培养NDV的方法,通过空斑法纯化并扩增得到了滴度为1.2×108 pfu/mL的F48E9株病毒；使用CCK-8检测F48E9对10种肿瘤共16株细胞的杀伤效果,发现F48E9能够杀伤包括肝癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌、肾癌、卵巢癌、胰腺癌在内的多种肿瘤细胞,但是不同肿瘤细胞对F48E9的敏感程度不同;F48E9能够在肿瘤细胞中复制,不同细胞中病毒复制效率不同,并且造成细胞出现变圆脱落等病变现象,相同时间内,初始病毒感染量,细胞病变(CPE)越严重;用不同剂量的F48E9病毒感染A549和HepG2细胞,通过Annexin V-FITC/PI染色并流式分析后发现病毒能够促进细胞发生凋亡,随着初始感染量的增加,发生凋亡的细胞比例逐渐增加。(2)建立了 CNE1、HepG2、MCF7细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,在用F48E9进行瘤内注射治疗后发现病毒能够显著抑制肿瘤的生长并且未见对治疗小鼠的毒副作用;F48E9株病毒急性攻毒的小鼠与对照组相比并未出现异常,其各组织也未出现明显病变。(3)为了能够更为快速便捷的测定NDV病毒的滴度,本研究利用原核表达得到的F48E9株核蛋白(NP)免疫小鼠制备了 7株对NDV反应性良好的单克隆抗体,筛选得到一抗体组成配对建立了双抗体夹心ELISA方法用于病毒的滴定。本研究对该系统的封闭条件、样品和酶标抗体的作用时间进行了优化。该ELISA方法能够有效滴定4.6×105pfu/mL～7.5×106pfu/mL的病毒,具有良好的稳定性和特异性,并且与空斑测定病毒滴度的方法相关性良好(R2>0.97)。总之,本研究验证了新城疫病毒F48E9株在体外和体内均具有良好的抗肿瘤活性,为后续开发NDV溶瘤制剂奠定了基础;同时建立了基于病毒NP单抗的双抗体夹心ELISA,为NDV病毒滴定提供了一个较传统空斑滴定法更为简便快速高通量的替代方法。